Максимально очищенные препараты (новогаленовые) и препараты индивидуальных веществ

     Методы  выделения сердечных гликозидов из растений имеют более чем столетнюю  историю и постоянно совершенствуются. Именно растения продолжают оставаться единственным промышленным источником их получения.

     Экстракцию  сердечных гликозидов из растений, учитывая их растворимость, обычно осуществляют органическими растворителями —  спиртами, ацетоном, этилацетатом, чаще с добавками в них воды. Очистку  от хлорофиллов и смол проводят, как правило, адсорбцией на оксиде алюминия из водноспиртовых растворов.

     Выделение гликозидов в индивидуальном состоянии  основано, главным образом, на адсорбционно-хроматографических методах или противоточном распределении  веществ в специально подобранных  системах растворителей — жидкостная экстракция.

     Технология  препаратов сердечных  гликозидов

     Адонизид (Adonisidum) получают из травы адониса  весеннего (горицвета или черногорки) (Adonis vernalis L.). Технология препарата разработана Ф. Д. Зильбергом (ВНИХФИ). Измельченную траву адониса весеннего (активность не менее 50—66 ЛЕД в 1 г) экстрагируют циркуляционным способом в аппарате типа Сокслета. В качестве экстрагента используют смесь, состоящую из 95 частей хлороформа и 5 частей 96% этанола по объему. Указанный экстрагент получил название универсального, так как относительно хорошо извлекает все сердечные гликозиды. В то же время сопутствующие гидрофильные вещества переходят в эту смесь в незначительных количествах.

     Экстракцию  растительного сырья проводят до полного извлечения гликозидов. В  полученном извлечении наряду с гликозидами (адонитоксин, цимарин и др.) содержатся хлорофилл, органические кислоты, смолоподобные  вещества и др. Отделение суммы  гликозидов от основной массы гидрофобных  сопутствующих веществ осуществляют путем смены растворителя. Для этого из полученного извлечения отгоняют экстрагент при температуре не выше 60 °С и разрежении не менее 59994,9 Н/м2. Когда кубовый остаток в испарителе по массе приблизительно будет равен взятому сырью, к нему добавляют равное количество воды и продолжают упаривание до полного удаления хлороформа и этанола.

     При этом осадок выпадают нерастворимые  в воде вещества (хлорофилл, смолы  и др.)- Водный раствор, содержащий сумму  гликозидов, небольшое количество пигментов  и других сопутствующих веществ, сливают с осадка и фильтруют  на нутч-фильтре через двойной  слой фильтровальной бумаги и слой алюминия оксида толщиной 1—1,5 см. Эту  операцию применяют для удаления оставшихся в растворе сопутствующих  веществ, причем алюминия оксид практически  не адсорбирует сердечные гликозиды  и они переходят в фильтрат.

     В фильтрате определяют биологическую  активность. Из 275 кг травы горицвета (50—60 ЛЕД) получают около 100 кг концентрата  адонизида (100—200 ЛЕД в 1 мл). К концентрату  добавляют этанол, хлорбутанолгидрат  и воду в таком количестве, чтобы  в 1 мл конечного продукта содержалось 20% этанола, 0,5% хлор- бутанолгидрата и 23—27 ЛЕД. Предназначен препарат для внутреннего применения, выпускается во флаконах темного стекла по 15 мл. Применяют в качестве сердечного (кардиотонического) средства. Хранят адонизид в прохладном, защищенном от света месте. Препарат контролируют ежегодно.

     Список  Б.

     Адонизид-концентрат с активностью 85—100 ЛЕД в 1 мл и  содержанием этанола не менее 20 % выпускается в бутылях как  полуфабрикат, который используется для производства препарата «  Кардиовален ».

     Список  А.

     «Сухой  адонизид» предложен Н. А. Бугрим и Д. Г. Колесниковым (ХНИХФИ). Он получен дополнительной очисткой адонизида-концентрата. Сумму гликозидов экстрагируют из водного раствора хлороформ-этанольной смесью (2:1). Полученное извлечение упаривают, остаток растворяют в 20% этаноле и раствор пропускают через колонку, заполненную алюминия оксидом сорта «для хроматографии». Колонку промывают 20% этанолом до отрицательной реакции подлинности в элюате. Из объединенных элюатов и фильтрата экстрагируют гликозиды хлороформ-этанольной смесью (2:1). Извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом, упаривают в вакууме досуха, остаток растворяют в 95% этаноле. Из полученного раствора гликозиды осаждают эфиром. Осадок отделяют и сушат. Получают аморфный желтый порошок горького вкуса, негигроскопичный, стойкий при хранении в обычных условиях. Выход из 2 кг адонизида- концентрата (85 ЛЕД в 1 г) составляет 8,1—8,5 г адонизида сухого.

     Биологическая активность препарата 14 000—20000 ЛЕД в 1 г. Применяют для приготовления  таблеток, содержащих по 0,00075 г адонизида. Активность 1 таблетки 10—15 ЛЕД.

     Лантозид (Lantosidum) получают из листьев наперстянки  шерстистой (Digitalis lanata Ehrh.), активность не менее 60 ЛЕД в 1 г. Листья измельчают и экстрагируют 24% этанолом в 2-х экстракторах. В экстрактор 1 загружают 50 кг сырья, заливают 8-кратным количеством этанола  и настаивают в течение 16—20 ч. Для  ускорения диффузии растворитель циркулируют 2—3 р Полученный экстракт (300 л) сливают  в отстойник для осаждения  сопутствующих веществ. В экстрактор 1 заливают новую порцию 24% этанола (400 л) и настаивают 16—20 ч. Затем ее сливают  и используют в качестве экстрагента  свежей порции сырья загруженного в  экстрактор 2. Через 16—20 ч извлечение из экстрактора 2 сливают в отстойник  для осаждения сопутствующих  веществ, а в него снова заливают 400 л 24% этанола и оставляют для  настаивания на 16—20 ч, после чего экстракт сливают и используют для  следующей порции сырья.

     Из  отработанного сырья в экстракторе 1 рекуперируют этанол, в него загружают  новую порцию сырья и настаивают с извлечением, полученным из экстрактора 2, и т. д. Последующую экстракцию проводят так же, как описано выше.

     В каждой отдельной порции водно-этанольного  экстракта. (300 л) осаждают сопутствующие  вещества 40% водным раствором5 свинца уксуснокислого. Раствор прибавляют постепенно по 1,0— 1,5 л при перемешивании. Всего  на осаждение расходуется 20 л раствора свинца уксуснокислого. При полном осаждении, которое определяется отсутствием  помутнения пробы при прибавлении  к ней нескольких капель раствора свинца уксуснокислого, образовавшийся аморфный осадок отстаивают 18—20 ч. Прозрачный раствор сифонируют, а оставшуюся часть вместе с осадком отфильтровывают  через бельтинг. Раствор объединяют с фильтратом и обрабатывают для  осаждения ионов свинца 25% раствором  натрия сульфата, добавляя его порциями по 0,5 л. На полное осаждение ионов  свинца расходуется 12 л раствора.

     Из  очищенного водно-этанольного экстракта  гликозиды извлекают органическим растворителем. Для этого 200 л экстракта  и 20 л смеси метилена хлористого и этанола (3:1) перемешивают в аппарате с мешалкой 30 мин, затем на 30 мин  оставляют для расслаивания и  отстоявшийся нижний слой раствора гликозидов в метилене хлористом сливают. Операцию повторяют 3 раза, каждый раз загружая в аппарат по 20 л смеси метилена хлористого с этанолом (3:1). Экстракт обезвоживают высушенным натрия сульфатом, отгоняют растворитель при температуре 37—40 °С и разрежении 66661—73327,1 Н/м2. Кубовый  остаток в количестве 1,5—2,0 л сливают  в кристаллизатор и помещают-в  вытяжной шкаф. По мере испарения метилена хлористого выделяется сумма гликозидов в количестве 285,8 г. Гликозиды растворяют в 3 л 96% этанола и определяют биологическую  активность. На основании полученного  анализа в раствор добавляют  этанол и воду с таким расчетом, чтобы активность препарата составляла 10—12 ЛЕД в 1 мл. содержание этанола  — 68—70%. Полученный раствор фильтруют  на фильтр-прессе через стерилизующие  пластины. Технология препарата разработана  в ВИЛР. Применяют главным образом  в амбулаторной практике для поддерживающей терапии при хронической недостаточности  кровообращения.

     Лантозид  выпускают во флаконах-капельницах  по 15 мл. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

     Список  Б.

     Коргликон (Corglyconum) получают из травы ландыша  майского (Convallaria majlis L.) и его географических разновидностей — Закавказского (С. transcaucasica Utr.) и дальневосточного- кейскея (С. keiskei Migu.). Технология препарата разработана  в ХНИФХИ.

     Траву ландыша (биологическая активность не менее 120 ЛЕД экстрагируют 80% этанолом в батарее из 4-х экстракторов методом противотока. В первый экстрактор загружают 45 кг травы, 3,0 кг кальция  карбоната, 0,3 кг кальция оксида, заливают 250 л 80 % этанола. Через 8—10 ч извлечение из первого экстрактора передавливают  во второй подачей в него свежего  экстрагента.

     После заполнения всех экстракторов и по истечении нужного времени настаивания  в последнем из него собирают экстракт со скоростью 20 л/ч. Его подают в вакуум-выпарной аппарат и полностью отгоняют этанол при температуре 50—60 °С и  вакууме 86659,3—93325 Н/м2. К кубовому остатку  прибавляют раствор 10 г квасцов алюмокалиевых  в 50 мл воды очищенной и отстаивают 3—5 ч. Отстоявшийся раствор отделяют от смол фильтрованием через марлю. Смолу промывают раствором натрия хлорида (0,3 кг на 20 л воды) до полного  извлечения из нее гликозидов.

     Водный  раствор гликозидов фильтруют на нутч-фильтре через один слой бязи и два слоя фильтровальной бумаги и передают на адсорбционную колонку  из нержавеющей стали, высотой 75 см, диаметром 30 см, заполненную 18 кг алюминия оксида второй группы активности. Через  колонку последовательно пропускают раствор гликозидов, промывные воды и 40 л обессоленной воды. При этом водный раствор гликозидов полностью  очищают от дубильных веществ. Раствор, пропущенный через колонку, должен иметь значение рН 6,0—7,0; если оно  ниже 6,0, раствор нейтрализуют натрия гидрокарбонатом.

     Гликозиды из водного раствора переводят в  органический растворитель, повторно обрабатывая его хлороформом  до обесцвечивания органического растворителя, а затем смесью хлороформ-этанол (3:1), при добавлении аммония сульфата, до полного извлечения гликозидов. Хлороформно-этанольное извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом и упаривают  при температуре 70—80 °С.

     К кубовому остатку в количестве 6 л прибавляют 0,5 кг высушенного натрия сульфата и 0,1 кг угля активированного  оставляют на 2 ч и фильтруют  через фильтровальную бумагу. Очи  щенный кубовый остаток упаривают  при температуре 80—90 и вакууме 87992,52—93325,4 Н/м2. Сухой остаток растворяют Ц 3 л очищенной воды, фильтруют  и подают на колонку заполненную 3 кг алюминия оксида I—II группы активности. Колонку промывают очищенной  водой. Из очищенного водного, раствора гликозиды извлекают хлороформ-этанольной смесью (4:1). Извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом и сгущают при  вакууме 79993,2—86659,3 Н/м2 до 1 л кубового остатка. К нему приливают эфир этиловый, быстро перемешивают' и эфир сливают. Остаток растворяют в 1,3 кг ацетона, добавляют ОД кг угля активированного  и фильтруют. Фильтрат упаривают  до консистенции экстракта густого. Экстракт растирают с безводным  эфиром, эфир сливают и операцию повторяют 5—7 раз до получения тонкого  аморфного порошка, который растирают  до полного удаления эфира и сушат  на воздухе. Выход коргликона 100 г, активность 19 000—27 000 ЛЕД в 1 г.

     Препарат  выпускают в виде 0,06% раствора для  инъекций в ампулах по 1мл (активность 11 —16 ЛЕД). Раствор готовят с добавлением  консерванта — 0,4% хлорбутанолгидрата, стерилизуют фильтрованием через  мембранные фильтры с диаметром  пор не более 0,3 мкм. Применяют внутривенно, при острой сердечной недостаточности. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

     Список  Б.

     Дигитоксин (Digitoxinum) получают при ферментации  листьев, экстрагировании из них  действующих веществ, очистке вытяжки, выделении суммы гликозидов, получении  дигитоксина, стандартизации.

     Предварительная ферментация листьев увеличивает  выход дигитоксина в 4 раза. С этой целью измельченные листья наперстянки  замачивают водой (37—40 °С) и оставляют  при этой температуре на 40—48 ч. Листья после ферментации помещают в  реактор с мешалкой и трижды экстрагируют смесью метилена хлористого и этанола. Полученную вытяжку упаривают под вакуумом, при температуре 50 °С. Концентрированный экстракт обрабатывают формамидом и проводят очистку (жидкостную экстракцию), обрабатывая вытяжку бензолом 5 раз, смесью бензола и хлороформа (3:2) до 10 раз. Вытяжку упаривают под вакуумом, остаток растворяют в хлороформе. Хлороформный раствор сердечных гликозидов переносят на колонку с алюминия оксидом для их распределения: в верхнем участке — гитоксин, в нижнем — дигитоксин.

     Дигитоксин  элюируют с алюминия оксида метанолом  под контролем УФ-лампы. Дигитоксин имеет голубое свечение, гитоксин — коричневое. Элюат, содержащий дигитоксин, упаривают под вакуумом досуха. Остаток  растворяют в ацетоне, упаривают  под вакуумом, добавляют бензол и  оставляют для кристаллизации дигитоксина. Перекристаллизацию повторяют несколько  раз при комнатной температуре. Кристаллы промывают этанолом и  высушивают на воздухе.

     Дигитоксин  — белый кристаллический порошок, практически нерастворим в воде, мало растворим в этаноле и  хлороформе, очень мало в эфире. 1,0 г должен содержать 8000—10 000 ЛЕД, в.р.д. внутрь — 0,0005 г, в.с.д. — 0,001 г. Выпускают  в таблетках по 0,0001 г и свечи  по 0,00015 г. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

     Список  А.

     Целанид, дигоксин (Celanidum, Digoxinum) получают из листьев  наперстянки шерстистой. Дигоксин представляет собой вторичный гликозид. Его  получают путем ферментативного  и щелочного гидролиза целанида. В качестве экстрагента используют 90% метанол. Вытяжку подвергают многократной очистке путем смены растворителя, экстракции жидкость—жидкостью и хроматографирования  на алюминия оксиде. Из очищенного раствора на холоду выпадает кристаллический  осадок, представляющий собой сумму гликозидов (дигиланиды А, В, С), — технический продукт. Его растворяют в этаноле при нагревании с углем активированным и оставляют на холоду для кристаллизации. Выпавшие кристаллы представляют собой смесь нативных гликозидов дигиланиды А, В, С. Стандартизацию проводят биологическим путем. 1,0 г препарата должен содержать 14 000 ЛЕД. Это белый кристаллический порошок, мало растворимый в воде и этаноле, растворимый в метаноле. Чувствителен к свету.