Возбудитель туберкулеза

8. Механизм передачи возбудителя.

 Перемещения возбудителя  туберкулеза от зараженного организма  в восприимчивый здоровый является  для него биологической необходимостью, так как это обеспечивает сохранение  возбудителя в природе как вида. Бесконечное пребывание возбудителя в организме невозможно, т.к. продолжительность жизни животного ограничена, а сего смертью погибает и возбудитель.

Попав из зараженного организма  во внешнюю среду,  возбудитель  лишается естественных условий существования. Следовательно, срок его пребывания во внешней среде тоже ограничен. Микобактерии должны вновь внедриться в организм восприимчивого животного. Весь процесс перемещения возбудителя  из зараженного организм в восприимчивый  здоровый называют механизмом передачи. Он состоит из трех фаз: выведение  возбудителя из зараженного животного, пребывание во внешней среде, внедрение  в организм здорового животного.

Механизмом передачи возбудителя  инфекции называют эволюционно сложившуюся  видовую приспособленность патогенного  микроорганизма к перемещению источника  возбудителя инфекции к здоровому  восприимчивому животному, что обеспечивает новые случаи заражения и непрерывность  эпизоотического процесса.  Характер передачи зависит от локализации  возбудителя в зараженном организме  и путей его выделения, а внедрения  в новый организм – от нахождения ворот инфекции (Бакулов, 1979; Конопаткин, Бакулов, 1984).

Выведение возбудителя туберкулеза  из организма зараженного  животного  осуществляется при физиологических  процессах (дыхание, молокоотдача, дефекация, мочеиспускание, десквамация эпителия) и при патологических явлениях (кашель, носовые истечения, понос и т.д.).

В организм животного возбудитель  внедряется через слизистую оболочку дыхательных путей или желудочно  – кишечного тракта.

В корм микобактерии туберкулеза  попадают с выделениями больных  животных. Загрязнение почвы происходит при выпасе больных животных,  орошении полей необеззараженным жидким навозом  и сточными водами предприятий, перерабатывающих животное сырье и  продукты (мясокомбинаты, убойные станции, молочные пункты и т.д.). Скорость санации  зависит от типа самой почвы и  входящих  в нее органических и минеральных  веществ, а также  температуры, влажности, рН и других факторов. Корма могут загрязняться в помещениях (скотных дворах, свинарники, птичники), где содержатся больные  животные, на территории фермы. Известны случаи заноса возбудителя в благополучные  хозяйства с зараженным сеном, соломой.

В навозе микобактерии туберкулеза  бычьего вида могут сохранять  жизнеспособность от 5 до 24мес. (Самоволов, Жаров, 1973).

Трупы павших от туберкулеза  животных и пораженные органы вынужденно убитых животных при определенных условиях также могут быть факторами передачи возбудителя. В труппах и пораженных органах микобактерии туберкулеза  могут выживать до 2мес. и даже до 2 лет. Гниение и разложение трупов слабо действует на возбудителя  туберкулеза. Несвоевременная уборка трупов и пораженных органов убитых животных  ведет к заражению  почвы, пастбищ, водоемов.

В мясе замороженном, хранящемся в холодильнике, возбудитель туберкулеза  сохраняет жизнеспособность до 1 года, в соленом мясе – до 45-60дн. Поэтому  использование необеззараженного  мяса животных, больных туберкулезом, может привести к заражению пушных зверей, собак, кошек.

Яйца кур, больных туберкулезом, могут содержать возбудитель  туберкулеза и способствовать его  передачи.

Совокупность факторов и  механизмов передачи возбудителя инфекции называют путями его распространения. Туберкулез может передаваться аэрогенным и алиментарным путем.

У людей возможно проникновение  возбудителя через кожу, например при разделке мяса убитых животных и при вскрытии трупов животных, павших туберкулеза. В звероводстве люди могут заразиться подобным образом  при вскрытии зверей, больных туберкулезом, и при съемке шкурок, когда при  разрыве брюшной стенки происходит контакт пораженных органов с  незащищенными руками (Хайкин, 1976).

Таким образом, пути передачи возбудителя туберкулеза чрезвычайно  разнообразны. При проведении противотуберкулезных мероприятий большое значение имеют  выявление этих путей и разрыв механизма передачи возбудителя.

9. Влияние химических факторов  на микобактерии.

Микобактерии туберкулеза  весьма устойчивы ко многим химическим веществам. Их высокая устойчивость связана со строением клеточной  стенки, которая обеспечивает им механическую осмотическую защиту (Ерохин, 1982).

В отношение кислот микобактерии довольно резистентны.  Так, в 5-10%-ном  растворе соляной и серной кислот они становятся жизнеспособными  в течение 24ч. В 5%-ном растворе фенола они не погибают в течение 24 ч. (Благодарный, 1980). Высокой бактерицидностью в  отношении микобактерий 1%-ный раствор  хлорамина  с добавлением 1%-ного раствора хлористого аммония (Вашков, 1977). 0,5%-ный раствор этостерила убивает  микобактерии туберкулеза в течение 30 мин., 5%-ный раствор карболовой кислоты – в течение 5 ч. и  3%-ный  раствор лизола – в течение 1ч. Однако, по другим данным, даже 10%-ный  раствор лизола убивает микобактерии туберкулеза только в течение 12ч. (Благодарный, 1980).

M.avium сохраняет вирулентность  в патологическом материале, хранящемся  в 30%-ном растворе глицерина  при температуре 5 С в течение  2 месяцев, а выживаемость в  течение 3 месяцев.

Довольно быстро микобактерии убивают 50-70% алкоголь (Lindner, 1971). Соление  и кипячение лишь незначительно  обезвреживает микобактерии.

Возбудители туберкулеза  довольно чувствительны к действию кратковолнового УФ излучения, и  при  облучении их в течение 30с. Погибало 92,3% микобактерий (Шахбанов с  соавт., 1972). Возбудитель бычьего  вида погибал при инфракрасном электронагреве при температуре 75 С в течение 60с., человеческого и птичьего видов  при 77 С – 3с. M.intracellulare при 75 С – 30с. Однако значительно устойчивее  к инфракрасному излучению и  электронагреву M.scrofulaceum, которая погибла  при температуре  75 С только через 5мин. (Позднякова, 1985).

Устойчивость микобактерий к химическим и физическим факторам обусловлена как их видовой принадлежностью, так и условиями в которых  они находятся. Атипичные микобактерии пор сравнению с M.bovis и  M.avium более  устойчивы к 3%-ному щелочному раствору формальдегида и 8%-ной эмульсии феносмолина, особенно M.intracellulare и M.gordonae (Колычев, 1984).

10. Иммунизирующие свойства  микобактерий.

Со времени открытия возбудителя  туберкулеза были проведены многочисленные исследования по изучению иммуногенности живых и убитых туберкулезных  и атипичных микобактерий.

Иммунопрофилактика туберкулеза  с помощью вакцин гетерогенного  типа, изготавливаемых из микобактерий, патогенных для холоднокровных, оказалась  неэффективной.

Иммунизация животных микобактериями туберкулеза, убитыми физичес - кими или химическими методами (тепло, солнечный свет, хлор, йод, олеиновая  кислота, мочевина, ацетоном, бензином и др.), не дала удовлетворительных результатов (Кальметт, 1929).

 При использовании  в качестве вакцин возбудителя  туберкулеза птичьего, человеческого,  мышиного видов микобактерий, выделенных  из медяницы, водяной черепахи, а  также эмульсии, приготовленной  из лимфатических узлов туберкулезных  животных, были установлены их  иммуногенные свойства.

Вакцина БЦЖ способствует образованию иммунитета у телят, но не обеспечивает надежной защиты от туберкулеза. Кроме того, появление  аллергии у вакцинированных животных и отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин от постинфекционных затрудняет ее применение.

  Как метод борьбы  с туберкулезом иммунизацию КРС  в ветеринарной практике не  проводят (Шишков с соавт., 1986). Некоторые  отечественные исследователи рекомендуют  использовать вакцину БЦЖ в  общем комплексе противотуберкулезных  мероприятий.

Изучение вакцинного штамма микобактерий человеческого вида В-115 показало его высокую остаточную вирулентность. Из штамма «Валле» микобактерий туберкулеза бычьего вида получен  новый авирулентный вакцинный штамм  «БК - Харьков» (Черкасс, Кандыба, Дикий, 1974).

Изученные иммунизирующие свойства вакцины из штамма БЦЖ, жидкой вакцины  «БК – Харьков», жидкой вакцины  из штамма В-115 (Вейсфлейер, 1975) и из штамма «К» (Говоров, Кассич с соавт. ,1978) на КРС в экспериментальных и  производных условиях. Прививка телят  не дала образования иммунитета достаточной  напряженности. При контакте с больными коровами телята заболевали туберкулезом.

  11. Диагностика.

Для успешной борьбы с туберкулезом важное значение имеет своевременное  выявление больных и зараженных животных. Диагноз на туберкулез у  животных устанавливают на основание  патологоанатомических, бактериологических, включая биологическую пробу, и  аллергическ5их исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических  признаков болезни.  В качестве дополнительных способов при диагностике  туберкулеза у животных применяют  серологические исследования и симультанную аллергическую пробу.

При проведении бактериологического  исследования используют бактериоскопический, культуральный и биологический  методы.

 Для исследования необходимы  кусочки печени, селезенки, легких  и лимфоузлы от убитых или  павших животных. При наличии  туберкулезных изменений в органах  берут пробы из пораженных  участков. При пересылке взятый  материал консервируют в 30%-ном  растворе глицерина. От живых  животных исследуют молоко, мокроту,  слизь, гной и фекалии.

Для бактериоскопии из материала  делают мазки, фиксируют их на пламени, окрашивают по Циль-Нильсену и исследуют  под микроскопом. Микобактерии обнаруживаются не в каждом случае, поэтому просматривают100-200 или даже 500 полей зрения.

Иногда в материале, присланном в лабораторию, туберкулезных микобактерий мало и обнаружить их трудно. Тогда  прибегают к методам обогащения: центрифугированию либо флотации. Для  этого материал измельчают, растирают  в ступке, заливают 1%-ным раствором  едкого натра, размешивают и переносят  в колбу, которую встряхивают 10-15 мин. Затем содержимое центрифугируют 10 мин., надосадочную жидкость сливают  и, осадок нейтрализуют кислотой и из него делают мазки. Метод флотации основан  на адсорбции углеводородами (ксилолом, бензином, лигроином) микобактерий туберкулеза  и всплывании последних вместе с  ними. Его используют чаще всего  при исследовании молока и мокроты, бронхиальной слизи, экссудата.

  Пи исследовании молока 30 мл его наливают в стерильные  флаконы с узким горлом емкостью 100 мл и добавляют равное количество 5%-ного раствора едкого натра.  Смесь встряхивают в течение  2-3 мин., а затем флаконы ставят  в водяную баню при температуре  50-60 С на 1час. Затем к содержимому  флакона добавляют 1 мл ксилола,  и снова встряхивают в течение  15 мин.  в шуттель-аппарате. После  встряхивания во флакон добавляют  дистиллированную воду, пока его  содержимое не поднимется до  узкой части горлышка. После отстаивания  в течение 1-2 ч. в нем образуется  сливкообразное кольцо. 3-4 капли  из него наносят пастеровской  пипеткой на слегка подогретое  предметное стекло. По мере подсыхания  наносят на предметное стекло  по 3-4 капли еще 2-3 раза, чтобы получить  толстый мазок. Мазки высушивают  в сушильном шкафу, обезжиривают  эфиром, фиксируют на пламени,  окрашивают по Циль-Нильсену и  микроскопируют.

 Для получения культур  микобактерий материал перед  посевом подвергают обработке  по методу Гона, Левенштейна-Сумиоши  или Аликаевой. При обработке,  по Гону, кусочки органов и  тканей измельчают и растирают  в ступке, затем заливают 3-10%-ным  раствором серной кислоты и   центрифугируют 10-15 мин. при 3 тыс.оборотов  в минуту. Период воздействия  кислотой не должен превышать  20-30 мин. Затем надосадочную жидкость  сливают, в осадок добавляют  несколько капель стерильного  физраствора и делают посевы  на питательные среды, а также  готовят мазки. Применяя метод  Левенштейна-Сумиоши, матеал обрабатывают  таким же образом, но перед  посевом осадок отмывают от  серной кислоты 1-2 раза физиологическим  раствором с помощью центрифуги. По методу А.П. Аликаевой материал  разрезают на кусочки , помещают  в ступку и заливают 3-6%-ным  раствором серной кислоты на 10-20 мин. Затем кусочки тканей промывают  5 мин. физраствором  и растирают.

Для получения культур  микобактерий делают посевы на питательные  среды (Петраньяни, Гельберга и др.). Каждый материал высевают на 5-10 пробирок о средой. Пробирки заливают расплавленным  парафином. Посевы просматривают не реже одного раза в неделю и выдерживают  в термостате не менее трех месяцев. В случае отсутствия роста с поверхности  среды делают соскоб платиновой петлей, готовят мазок для бактериоскопии и в случае обнаружения в нем  микобактерий делают посев на свежую среду.

Для биологического исследования используют тот же материал, который  был приготовлен для посева, а  наличие в нем серной кислоты  нейтрализуют 10%-ным раствором двууглекислой  соды.

Заражают кроликов, трех морских  свинок, а при необходимости трех кур и ведут за ними наблюдение.

12. Дифференциальная диагностика.

Микобактерии различаются  между собой по скорости и характеру  роста на питательных средах, по  морфологии, по патогенности и другим свойствам. Раньше определение вида их называли типированием, поскольку  они делились на типы. Для определения  вида микобактерий туберкулеза предложено немало методов: бактериоскопический, культуральный, биохимический и  тд.

Для определения вида чаще всего используют биологический  метод. С этой целью ставят биопробу на трех морских свинках и трех кроликах, а если необходимо, тои  на трех курах. Культуру микобактерий вводят животным в дозе 1мг сырой  бактериальной массы, суспендированной в 1мл стерильного физиологического раствора, морским свинкам подкожно в области паха, кроликам – внутривенно  в краевую вену уха, курам –  в подкрыльцевую вену. У морских  свинок при развитии туберкулезного процесса через 2-4 недели на месте введения культуры образуется язва, а также  увеличение и уплотнение регионарного лимфатического узла. Свинки прогрессивно худеют. У кроликов и кур при  развитии туберкулеза наблюдают  истощение и снижение аппетита. Кур  исследуют туберкулином. Через три  месяца морских свинок, кур и кроликов убивают, вскрывают и проводят бактериологическое исследование паренхиматозных органов.