Противовирусная активность препаратовт полипренол и воспренил в отношении вируса ИРТ КРС

Российская академия сельскохозяйственных наук

Сибирское отделение

ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока

МАЛАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ОТЧЕТ

о научно-исследовательской работе

ПРОТИВОВИРУСНАЯ  АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТОВ ПОЛИПРЕНОЛ И ФОСПРЕНИЛ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ИРТ КРС

Краснообск 2004

Содержание:

Введение

Вирусные заболевания крупного рогатого скота (КРС) широко распространены во всем мире, в том числе и в России, и остаются актуальной проблемой ветеринарной медицины.

В настоящее время противовирусные препараты нашли широкое применение в медицине. Разработаны препараты для борьбы с гриппом А и В, ОРВИ – адапромин, амбен, арбидол; против различных форм герпетического поражения – ацикловир, видарабин, пандавир; для лечения СПИДа – азидотимидин, триаптен, циклоферон. В ветеринарной практике противовирусные препараты не нашли пока широкого применения.

Химиотерапия и химиопрофилактика вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных – это новое направление в разработке средств защиты животных от инфекционных заболеваний.

              Одним из перспективных направлений в борьбе с инфекционным ринотрахеитом КРС, возможно, будет являться использование средств химиотерапии, направленное на подавление репродукции вируса в организме и сокращение частоты и длительности выделения его во внешнюю среду.

              В связи с этим  в настоящее время актуальным является поиск эффективных препаратов in vitro с перспективой использования их in vivo для лечения больных и инфицированных вирусами животных.

По мнению ряда исследователей, определение влияния препаратов на клеточные и вирусспецифические синтезы необходимо для первичного отбора препаратов. Выявление антивирусных свойств препаратов in vitro не решает вопроса о его токсичности и противовирусной активности в целом до проведения экспериментов in vivo, но дает, тем не менее, возможность сделать обоснованное заключение о перспективности испытуемого образца.

Из множества противовирусных препаратов наибольший интерес представляют доступные в сырьевом отношении и те, производство которых не требует больших материальных затрат. К таким препаратам относятся полипренолы пихты сибирской, иммуномодулирующее, противобактериальное и противовирусное действие которых (против Сендай-инфекции, гриппа человека) уже изучено.

Препарат фоспренил является  продуктом фосфорилирования полипренолов хвои, вырабатываемым из провитаминного концентрата. Установлена его противовирусная активность в отношении вируса чумы плотоядных, парвовирусов, аденовирусов, энтеровирусов животных, а также ИРТ КРС в опытах с использованием культур клеток.

В связи с этим целью наших исследований было сравнительное изучение противовирусной активности полипренола и его производного - фоспренила в опытах in vitro  на модели вируса ИРТ КРС.

1. Характеристика вируса инфекционного ринотрахеита КРС

Инфекционный ринотрахеит  - пустулезный вульвовагинит КРС  (ИРТ-ПВ КРС) – контагиозное вирусное заболевание, протекающее чаще в респираторной и генитальной формах. Респираторная форма проявляется в виде лихорадки, одышки, ринита, синусита, ларингита и трахеита, а половая – вульвовагинитов и абортов у коров, баланопоститов, орхитов у быков. Вирус может вызывать также конъюнктивиты, маститы, энцефалиты и поражения желудочно-кишечного тракта у телят младшего возраста.

Возбудитель – ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству герпесвирусов и обозначенный как герпесвирус КРС 1-го типа. Распространение его происходит чаще контактным  и аэрогенным путями, возможна механическая передача.

В естественных условиях болеет КРС всех пород и возрастов. Заболеваемость не иммунного скота может достигать 100%, летальность колеблется от 2 до 10% и вынужденный убой до 15%. Тяжелее всего болеет молодняк в возрасте от нескольких дней до 12-15 месяцев.

На возникновение ИРТ-ПВ КРС большое влияние оказывают различного рода стрессовые факторы и неблагоприятные условия среды обитания. Поэтому для успешной борьбы с заболеванием необходимо проводить весь комплекс ветеринарно-зоогигиенических мероприятий, обеспечивающих выращивание здоровых животных с высокой резистентностью.

Специфическую профилактику при этом чаще необходимо рассматривать как вынужденную меру, осуществление которой должно базироваться на точном знании эпизоотической обстановки.

Особенностью ИРТ-ПВ КРС является то, что переболевшие животные пожизненно остаются скрытыми вирусоносителями и при  снижении  резистентности организма под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды могут выделять вирус, являясь источником возбудителя инфекции. Вирус, проникший в незащищенное стадо, может нанести серьезный экономический ущерб хозяйству, вызвав острое заболевание у животных с максимально возможным охватом поголовья КРС (до 100%).

Большую опасность в распространении инфекции представляют быки-производители, сперма которых контаминирована вирусом. Осеменение коров такой спермой приводит к развитию у них гинекологических заболеваний и дальнейшему распространению инфекции.

Заболевание возникает, как правило, после завоза зараженных животных или скрытых вирусоносителей в благополучное по ИРТ-ПВ хозяйство, или при вводе не иммунных животных в неблагополучное хозяйство.

2. Противовирусные препараты

              Для иммунопрофилактики смешанных вирусных респираторных инфекций разработаны ассоциированные вакцины из живых, инактивированных вирусов. Однако при применении живых вакцин у животных часто возникают осложнения.  Кроме того, для применения вакцин в каждом случае необходим своевременный анализ этиологической структуры каждой вспышки болезни.              Пассивная иммунизация телят с использованием сыворотки, глобулина и цитрированной крови животных реконвалесцентов очень эффективна в ветеринарной практике, но не находит широкого применения вследствие громоздкости и сложности получения высокоактивных препаратов.

              Широкое  применение в хозяйствах нашли аэрозоли окислителей, антибиотиков и других антимикробных препаратов, но они  не оказывают воздействия на вирус в организме телят.

              Изучение стадий репродукции вирусов, чувствительных к действию химических соединений, позволяет выявить не только снижение урожая вирусов, но и определить локализацию их в клетке во времени, определить вид клеток, поражаемых в организме хозяина на различных стадиях развития болезни, степень взаимодействия и взаимосвязи клеточного метаболизма и синтеза вирусных компонентов и т. д.

              Отмечено, что селективная токсичность является основой эффективной химиотерапии. Ввиду того, что вирусы обладают только несколькими ферментами, репликация вируса зависит в основном от его способности модифицировать метаболизм инфицированных клеток, в результате которого синтезируются новая вирусная нуклеиновая кислота и белок, происходит сборка вирусных частиц. Таким образом, эта связь между репликацией вируса и обменом клетки хозяина дает возможность подобрать препарат, который может остановить развитие вирусной инфекции, не нарушая нормального клеточного обмена.

              К настоящему времени в эксперименте продемонстрированы принципиальные возможности воздействия различными синтетическими соединениями на отдельные этапы репродукции вируса: адсорбцию, пенетрацию, синтез вирусспецифических ферментов, вирусных белков и нуклеиновых кислот, сборку вирионов и внеклеточных вирусных частиц. 

              Определенные надежды на решение вопросов профилактики и лечения герпетических заболеваний появились после открытия интерферона. Широкий спектр противовирусного действия интерферона, отсутствие резистентных к препарату штаммов вирусов при лечении интерфероном позволили предположить перспективы его применения в качестве противогерпетического препарата.

              Помимо интерферона, в настоящее время успешно проходят испытания на лабораторных животных стимуляторы образования интерферона в организме – индукторы интерферона. Одним из наиболее изученных индукторов интерферона на модели экспериментальной герпетической инфекции у лабораторных животных являются синтетические полинуклеотиды – поли (И), поли (Ц), поли (Г). поли (Ц). Так, последний в дозе 200 мкг/мышь при внутримышечном введении в 5 раз снижает гибель инфицированных вирусом простого герпеса животных.

              Важным аспектом химиотерапии герпеса является использование иммуномодуляторов, а также сочетанное применение их с  химиопрепаратами.

              С 1996 г. в ветеринарной практике успешно применяется противовирусный лечебно-профилактический препарат фоспренил. Защитный эффект препарата, действующим началом которого являются полипренилфосфаты натрия, обусловлен как противовирусным действием фоспренила, так и его иммуномодулирующей активностью, связанной с усилением продукции некоторых цитокинов, играющих важную роль в защите организма от вирусной инфекции.

              В настоящее время во всех высокоразвитых странах расширяется фронт исследований вирусингибирующей активности хорошо известных в клинике и вновь синтезированных антибиотиков. Особенно интенсивно проводится поиск новых антибиотиков с четко выраженными противовирусными свойствами. Изыскания противовирусных антибиотиков ведутся по принципу их избирательного действия на один или несколько этапов репродукции вируса при сохранении интактными клеток хозяина за счет «обратимого» влияния на клеточные синтезы, изменение которых, в свою очередь, приводит к ингибиции репродукции вируса.

              Особый интерес представляют данные, полученные при комбинации различных индукторов. Ранее было показано, что левамизол является индуктором интерферона в организме и, по-видимому, вызывает продукцию иммунного интерферона. Таким образом, комбинированное использование различных препаратов можно рассматривать как перспективное направление в лечении вирусных инфекций.

              При подборе различных пар препаратов с разным механизмом действия часто удается достигнуть аддитивного или синергидного эффекта. В некоторых случаях при этом можно снизить дозу, а следовательно, и уменьшить возможность появления резистентных форм возбудителя, что крайне важно для профилактики и лечения вирусных инфекций. Основной задачей при подборе рациональных комбинаций являются выбор препаратов и оптимизация схем их применения.

3.Материалы и методы