Токсокароз и токсаскаридоз собак и пушных зверей

            Гельминтоовоскопические методы исследований позволяют выявлять в экскретах, секретах и соскобах яйца многих паразитических червей. Широко применяется в ветеринарной практике исследование проб фекалий по Фюллеборну, последовательного промывания и др.

        Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктпокаулов, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий методами Бермана - Орлова, Вайда и др.

       Гельминтоскопические, или макрогельминтоскопические, исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых наружу гельминтов или их фрагментов (члеников цестод).

       Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют: а) гельминтокопрологические исследования (исследование фекалий), б) исследование выделений других органов и др.[8]

                      Гельминтокопрологические исследования

       Большинство гельминтов, паразитирующих у животных, выделяют во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт яйца, личинок и фрагменты тела (членики). Поэтому гельминтокопрологические исследования являются основными методами прижизненной диагностики гельминтозов. Плановые гельминтокопрологические обследования животных в хозяйствах проводят два раза в год: первый раз в марте - апреле и второй в ноябре – декабре.

       Пробы фекалий берут от двух-трех возрастных групп. Результаты гельминтокопрологических исследований во многом зависят от правильности отбора и упаковки проб и своевременной доставки их и ветеринарную лабораторию. Для упаковки фекалий используют кульки и пакетики из целлофана и плотной бумаги. Жидкие фекалии можно пересылать в небольших баночках (бактериологические пробирки непригодны). Для исследований пригодны только свежевыделенные фекалии.

      Для этих же целей предложены специальные приборы, использование которых облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.

      Предложены большой и малый приборы конструкции Н. И. Ложкина, состоящие из стальных браншей, переходных ветвей и двух прикрепленных к ветвям полусферических поверхностей (рис. 1). Полусферическую часть прибора, тщательно промытую водой, осторожно вводят в прямую кишку животного.[10]

      У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки. Иногда допускается брать фекалии с пола, если они свежие и известно от какого животпого. От одного животного берут не менее 10-20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).

       Все пробы фекалий этикетируют: по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) пишут номер пробы (кличку коров). К пробам фекалий прилагают опись, где указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых - кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб. В сопроводительной следует указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации против фасциолеза).

       Необходимо как можно быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре через 16- 20 ч из яиц кишечных стронгилят выходят личинки, что затрудняет диагностику. Результаты исследования регистрируют в специальном журнале, в котором, кроме порядкового номера, вида, клички (номера) животного, метода и результатов исследования, обязательно отмечают возраст животного и интенсивность инвазии (количество яиц и личинок в препарате или в трех каплях взвеси).

       Оборудование для гельминтокопрологических исследований. Состав лабораторного оборудования (оптические приборы, аппараты, посуда, инструменты н другие предметы) и его стандартность оказывают существенное влияние на качество гельминтокопрологических исследований. Чем оно совершеннее, тем достовернее результаты исследования фекалий.

       Методы гельминтокопрологических исследований разделяют на качественные методы, позволяющие установить, какими видами гельминтов заражено животное, и количественные, дающие возмояшость судить об интенсивности инвазии, то есть степени зараженности животного тем или иным видом паразитических червей.[6]

Качественные методы гельминтокопрологических исследований.        Гельминтоовоскопические методы.

       В ветеринарных лабораториях пробы фекалий животных наиболее часто исследуют гельминтоовоскопическими методами. Их делят на простые и методы концентрации яиц гельминтов (флотации, осаждения и комбинированные).

       Метод нативного мазка. В ветеринарной практике имеет ограниченное применение, вследствие низкой его эффективности. Яйца паразитических червей удается обнаружить только при высокой и средней интенсивности инвазии. На предметное стекло наносят каплю равных частей воды и глицерина и небольшой кусочек фекалий (с булавочную головку), тщательно перемешивают стеклянной или деревянной палочкой; после удаления твердых частиц на эту смесь кладут покровное стекло и исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат и препятствует быстрому высыханию его. Рекомендуют исследовать 5-10 препаратов (капель). Этот метод используют в качестве дополнительного к другим метода.

      Методы концентрации яиц гельминтов разделяются на три группы, в зависимости от соотношения плотности яиц гельминтов и жидкости, в которой взвешены пробы фекалий животных.[3]

      Методы флотации. При методах флотации (всплывания) используют насыщенные растворы солей с более высокой плотностью (1,18-1,50), чем яйца паразитических червей. В лабораторной практике из флотационных жидкостей наиболее часто применяют насыщенный раствор натрия хлорида, или поваренной соли (плотность 1,18-1,2 при комнатной температуре). Для приготовления такого раствора в кастрюлю или ведро с кипящей водой постепенно всыпают при помешивании поваренную соль до образования на дне небольшого осадка (380-400 г на 1 л воды). Горячий раствор фильтруют через несколько слоев марли в бутыль и применяют после охлаждения (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).

          При диагностике некоторых гельминтозов используют также насыщенные растворы технической (гранулированной) селитры, или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 л кипящей воды), натриевой селитры, или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли и горячей воды 1:1), английской соли, или магния сульфата с плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 л горячей воды), натрия тиосульфата, или гипосульфита натрия, плотность которого колеблется от 1,38 до 1,40 (1750 г на 1 л кипящей воды), а также нитрата свинца с плотностью 1,5 (650 г на 1 л горячей воды). В последнем растворе всплывают яйца всех паразитических червей, включая яйца трематод, но деформируется оболочка яиц фасциол и парамфистомид.

        Для определения плотности насыщенных растворов солей используют денсиметр.

        Метод Фюллеборна. В пластмассовый пли стеклянный стаканчик емкостью 75-100 мл помещают пробу фекалий массой Зги постепенно добавляют 50- 75 мл насыщенного раствора натрия хлорида порциями при тщательном размешивают взвеси стеклянной палочкой. Плотные фекалии овец (коз и кроликов) предварительно растирают с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив при помешивании необходимое количество флотационной жидкости. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют, а взвесь фекалий фильтруют в другой стаканчик через нержавеющее металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,3-0,5 мм.

         Во время отстаивания заряженной пробы яйца многих видов нематод и цестод всплывают на поверхность. Через 45 мин. проволочной или спиральной петлей (диаметр 0,8- 1 си) снимают три капли поверхностной пленки и помещают их на предметном стекле. Не накрывая капли покровными стеклами, просматривают их под малым увеличением микроскопа при опущенном вниз конденсоре. Число обнаруженных яиц каждого вида гельминта в трех каплях подсчитывают. Метод Фюллеборна прост, дешев, удобен и сравнительно эффективен при многих нематодозах, поэтому его широко применяют в лабораториях и в других ветеринарных учреждениях.

         Методы осаждения. При методах осаждения (седиментации) пробы фекалий смешивают с водой, плотность которой меньше яиц паразитических червей.[2]

         Метод последовательного промывания. Пробу фекалий массой 3-5 г кладут в стакан (плотные фекалии овец предварительно растирают в ступке с небольшим количеством воды) и добавляют порциями 15-кратное количество воды, размешивая взвесь до равномерной консистенции. Смесь фильтруют через ситечко в стакан емкостью 175- 200 мл, доливают воду при помешивании почти до краев стакана, после чего фильтрат отстаивают 5 мин (до образования осадка). Затем верхний слой жидкости сливают или отсасывают спринцовкой до осадка, а к осадку снова добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают 5 мин, после чего жидкость сливают или отсасывают до осадка. Такие манипуляции повторяют до просветления надосадочного слоя воды в стакане. Последний раз надосадочный слон сливают, а осадок наносят на большое предметное стекло (7X10 см) и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики трематодозов жвачных, плотоядных и птиц, а также других гельминтозов животных.

        Комбинированные методы. Основаны на принципе осаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы сравнительно редко используют в ветеринарных лабораториях.

        Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (1- 2 г) размешивают в стаканчике с 20-30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и натрия хлорида. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором натрия хлорида. Этот метод применяют преимущественно при нематодозах свиней.

         Метод Щербовича. Техника исследования фекалий в принципе такая же, как при методе Дарлинга. Отличается от предыдущего метода тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенные растворы английской соли, или натрия нитрата (при метастронгилезе свиней) и натрия тиосульфата. Данный метод более эффективен.[1]

                            Гельминтоларвоскопические методы.

       Метод Бермана - Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий пз средней воронки, резиновой трубки (10-15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (37-40°). 10- 15 г свежих фекалий кладут на сито или завертывают в марлю и осторожшо опускают в воронку (предварительно шарики фекалий лучше разрушать). Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2-4 ч. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку ц центрифугируют 2 - 3 мин. После этого верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на большое предметное стекло (7X10 см) и исследуют под микроскопом.

       Многие ветеринарные лаборатории считают, что применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами.

   Гельминтоскопические или макрогельминтоскопические методы.

      При гельминтоскопии (осмотре) фекалий животных можно обнаружить гельминты или их фрагменты, которые выделяются под воздействием медикаментарных средств или самопроизвольно (мониезий и тизаниезий у жвачных, дрепанидотений у гусей и др.). Чтобы обнаружить более мелких паразитических червей у мелких и средних животных, исследуют методом последовательного промывания всю единовременную порцию фекалий, а у крупных животных - часть фекалий. Собранные фекалии после предварительного осмотра помещают в стеклянный цилиндр или небольшую банку, разбавляют 10-кратным количеством воды и тщательно размешивают. После 10- 15-мипутного отстаивания верхний слой жидкости сливают, а осадок снова смешивают с водой и отстаивают.[7]

        Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления фильтрата. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок малыми порциями просматривают в кюветах с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консервирующую жидкость. Чтобы выявить мелких гельминтов, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10-20-кратным увеличением или стереоскопического биологического микроскопа (МБС).

         Для ускоренного сбора паразитических червей разной величины из фекалий животных иногда применяют метод отсеивания, для чего используют набор из нескольких металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Фекалии, находящиеся па верхнем сите, промывают струей воды, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости от величины задерживаются на разных ситах и их выбирают и исследуют.[6]

        Количественные методы гельминтокопрологических исследований применяют для установления степени (интенсивности) гельминтозной инвазии при жизни животных, а также для выяснения эффективности проводимых дегельминтизаций на основании сравнения числа обнаруженных яиц или личинок гельминтов до и после назначения антгельминтиков животным. Наиболее распространенными являются стандартизированные методы Фюллеборна, последовательного промывания и Бермана - Орлова, методика выполнения которых в принципе такая же, как и одноименных качественных гельминтокопрологических методов.

        Количественные методы характеризуются рядом особенностей: взятие навесок экскрементов проводят в определенные часы суток; стаканчики, воронки и ситечки равного объема или диаметра; пробы фекалий одинаковые по объему; время отстаивания взвеси фекалий одно и то же; петли и предметные стекла одного диаметра (размера); реактивы идентичные.