Саркоцистоз свиней

     Kozar (1971) рекомендует окрашивать срезы раствором генциан-виолета в пропорции 1 : 5000 в течение 5 минут, 2-3 раза обесцвечивать по 5-10 минут 1.5-2% уксусной кислотой, промывать дистиллированной водой, затем раздавливать в компрессориуме и просматривать под микроскопом.

     Согласно  модификации В. И. Голубкова, к 98 мл 2,5% раствора метиленовой сини добавляют 2 мл 0,1н азотной кислоты и 1-2 капли этой смеси наносят на срез, выдерживают 3-4 минуты, промывают дистиллированной водой, затем зажимают стеклами компрессориума и просматривают при малом увеличении под световым микроскопом. Автор рекомендует этот метод окраски как наиболее эффективный при исследовании дефростированного мяса.

Гистологический метод.

     Метод состоит из пяти этапов и более: I) фиксация; 2) консервирование; 3) приготовление гистологических срезов; 4) окрашивание и промывание срезов; 5) микроскопирование.

     Пробы тканей различных органов крупного рогатого скота, пораженного S. cruzi, фиксируются или в 10% забуференном формалине, или в жидкости Bouin, или в фиксаторе Helly. Часть проб после фиксации заливают парафином, затем готовят срезы толщиной 5 мкм, другую часть заливают метакрилатом и готовят срезы толщиной 3 мкм. Срезы окрашивают или гематоксилином-эозином, или гематоксилином, или парааминосалициловой кислотой.

     Для окраски срезов, фиксированных гликольметакрилатом, используют метод McManus для окрашивания гликогена; срезы обрабатывают 1% ПАСК в течение 10 минут, промывают дистиллированной водой в течение 5 минут, опять окрашивают ПАСК в течение 20 минут, промывают водопроводной водой 10 минут, затем в течение 30 минут окрашивают Gil-III-гематоксилином, подсинивают по Scott, промывают водопроводной водой в течение 2 минут. Пластические срезы (залитые парафином) промывают дистиллированной водой, дегитратируют 95%, затем 100% этанолом, очищенным ксилолом и готовят препараты в синтетической среде.

     Фиксация  проб тканей, пораженных саркоцистами, 10% забуференным формалином широко используется. В качестве фиксатора применяли также 2% забуференный глутаральдегид, раствор Bouin или фиксатор Helly.

     Из  консервированных парафином или  гликольметакрилатом проб готовили срезы толщиной 3-7 мкм и окрашивали их гематоксилином-эозином, ПАСК, ализаровым красным, красками von Koss, Nocht, Giemsa, ферроциа-нидом, по Wilderl, Gram, метиленовой синью, гематоксилином Heidenhain и другими красителями.

Извлечение  саркоцист в физиологическом  растворе.

     Метод предложен Erber (1977). Пробы мышц (10 г) разрезают на кусочки длиной 3 мм, помещают в колбу Эрленмейера с 50 мл физиологического раствора, добавляют стеклянные бусинки диаметром 4 мм, взбалтывают, затем суспензию пропускают через сито с диаметром отверстий 600- 700 мкм, центрифугируют. Осадок наносят на предметное стекло и препарат просматривают под световым микроскопом.

     Jungmann и Knoch (1980) модифицировали метод Erber (1977): при обнаружении саркоцист компрессорным методом, предварительно добавив каплю физиологического раствора, срезы переносят пинцетом в центрифужную пробирку,   затем добавляют 10-кратный объем (к объему мышечного среза) физиологического раствора, 10 стеклянных бусинок диаметром 4 мм, закрывают пробирку резиновой пробкой и встряхивают вручную 5-8 минут. Удалив предварительно стеклянные бусинки проволочной петлей, центрифугируют 4-5 минут при 2000 об/мин, декантируют и весь осадок наносят на предметное стекло и микроскопируют при 160х и 640х увеличении.

     Метод извлечения саркоцист по Erber (1977) и  гистологический метод используют для дифференциации саркоцист различных видов рода Sarcocystis у одного и того же промежуточного хозяина.

2.3.Методы обнаружения мерозоитов.

Метод Козелкина (1928).

     С поверхности свежих срезов мышц лезвием  бритвы или скальпелем делают соскоб и наносят его на обезжиренное предметное стекло в виде мазка или делают мазок-отпечаток, подсушивают метиленовым или этиловым спиртом или спирт-эфирной смесью и окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 20 минут. При иммерсионной системе микроскопа в мерозоитах хорошо вилны светлые ядра с ярко-красными глыбками хроматина. Передняя часть мерозоита окрашивается в розовый, а задняя - в голубой цвет.

Метод Kozar (1971).

     Применяется для выявления мерозоитов из микросаркоцист. Навеску 2- 5 г исследуемой мышечной ткани переносят в ступку, добавляют 0,5- 2,0 мл физиологического раствора и тщательно растирают пестиком. Для исследования каплю полученной кровянистой жидкости помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при среднем увеличении и слегка закрытой диафрагме.

Метод переваривания мышц в желудочном соке.

     П. А. Владимирова (1971) предложила ускоренный метод переваривания фарша с целью обнаружения Protozoa: навеску фарша (10 г) помещают в плоскодонную колбу, заливают 25-кратным количеством искусственного желудочного сока, составленного по прописи: 3 г пепсина, 1 г концентрированной соляной кислоты и 100 луг воды. Колбу помешают в термостат при 42-47°С на 4-5 часов, после чего содержимое колбы переносят в чашки Петри и просматривают их под микроскопом.

     О. В. Рыбалтовский (1971), используя основной принцип метода П. А. Владимировой, модифицировал его для выявления трофозоитов саркоцист в мышечной ткани.

     Навеску (2-3 г) исследуемой мышцы тщательно измельчают, помещают в плоскодонную колбу и заливают 10-кратным объемом искусственного желудочного сока (в прописи П. А. Владимировой). Колбу помещают в термостат при 38-40° С на 1 час. Затем содержимое колбы фильтруют через мелкое ситечко в центрифужные пробирки. Центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 2- 3 минут. Из осадка со дна пробирки пастеровской пипеткой берут 2-3 капли, наносят их на обезжиренные предметные стекла, делают мазки, высушивают и фиксируют спиртом. Красят по Романовскому-Гимза в течение не больше 10 минут, так как трофозоиты саркоцист очень быстро воспринимают краску после пребывания в искусственном желудочном соке. Мазки исследуют под иммерсией.

     Посредством метода переваривания мышц в желудочном соке, кроме эндозоитов, выявляются также целые микросаркоцисты (3. И. Кислякова, О. В. Рыбалтовский, 1980).

Метод переваривания мышц трипсином.

     Эффективным методом выделения трофозоиты (брадизоиты, мерозоиты, эндозоиты и др.) считается метод ферментативного переваривания мышечных тканей трипсином, предложенный Erber (1977). Навеску мышечной ткани (10 г) измельчают до кусочков величиной 3 мм, помещают в колбу Эрленмейера на 250 мл и добавляют 50 мл раствора трипсина и при постоянном перемешивании с использованием магнитной мешалки выдерживают при 20-23° С в течение 30 минут. Суспензию пропускают через сито с диаметром отверстий 600-700 мкм, центрифугируют, осадок наносят на предметное стекло и просматривают при 500-кратном увеличении.

     Prestwood (1980) после грубого измельчения  исследуемых мышц (20 г) помещают навеску в колбу и заливают ее 10-кратным объемом переваривающего раствора (10 г пепсина, 1660 мл водопроводной воды, 13,3 мл концентрированной соляной кислоты). Пробы выдерживают в этом растворе 2 часа в термостате при 37°С. К концу переваривания содержимое колбы фильтруют, выделяя осадок. Осадок суспендируют в 15 мл воды, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 минут, затем декантируют, переносят на предметное стекло и исследуют при 200-400-кратном увеличении.

Гомогенатный  метод.

     Erber (1977) выделял цистозоиты из саркоцист  путем измельчения мышц (50 г) при помощи ножевого гомогенизатора с добавлением равного объема физиологического раствора. Из полученной суспензии готовят мазки, окрашивают по Гимза и исследуют под микроскопом при 500-кратном увеличении.

     Hinaidy (1980) модифицировал гомогенатный метод следующим образом: 20 г грубо измельченной мышечной ткани, очищенной от жира и слизистых оболочек, помещают в миксер, добавляют 80 мл физиологического раствора и гомогенизируют в течение 30 секунд. Суспензию дважды пропускают через сито с диаметром отверстий 1,5 и 1 мм и центрифугируют в течение 2 минут. Осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при помощи стереомикроскопа при 25-50-кратном увеличении.

Метод выдавливания мясного  сока.

     Согласно  описанию А. А. Богуша (1976), навеску мяса (5 г) измельчают и растирают в ступке с добавлением 0,5-2,0 мл физиологического раствора. Пестиком раздвигают остатки мышц по краям ступки, а суспензию по каплям наносят с помощью пипетки на предметные стекла. Мазки можно фиксировать и окрашивать по Романовскому-Гимза. В этом случае препарат исследуют под иммерсией.

     2.4.ЛЕЧЕНИЕ

     Лечение сульфапиридазином натрия.

     Учитывая  родственность саркоцист, токсоплазм и эймерий, а также политропность сульфапиридазина натрия на условно патогенную микрофлору, изучают  его терапевтическую эффективность при саркоцистоае свиней. Для этой цели в опыт берет по принципу аналогов 15 поросят 3-х месячного возраста, которые находились в условиях, исключающих спонтанное заражение. У подопытных животных дважды, с интервалом 15 дней, исследовали на наличие саркоцист пробы мышц, взятых методом биопсии. Во всех случаях результаты были отрицательными. Животных инвазировали спороцистами саркоцист б дозе 300-400 тыс.экз.

     На  шестнадцатый день инвазирования, в  период проявления первых клинических признаков заболевания, животных (поросят) подопытной группы в количестве 10 гол. обработали 10% -ным раствором сульфапиридазина в дозе 75 мг/кг живой массы. Через сутки обработку массы повторили в той же дозе препарата. Поросята в количестве 5 гол., инвазированные спороцистами, служили контролем. Результаты клинических наблюдений показали, что на 18-20-й день после заражения у зараженных, но не леченных сульфапнридазином натрия животных начали появляться первые клинические симптомы заболевания саркоцнстозом. У животных наблюдались угнетение, жажда, отсутствие аппетита. Перистальтика усилилась, была слышна на расстоянии. Температура тела + 39,8-+40,5°С , пульс 110-125, дыхание 60-80. Аналогичные клинические признаки заболевания у животных были выражены в течение 6-8 дней. Затем наблюдалось улучшение общего состояния организма - уменьшение сонливости, нормализация перистальтики кишечника, температурной реакции 38,5-+39,1°С, пульс 70-80 и дыхание 45-50.

     На 18-20 день заболевания общее состояние  организма животных улучшилось. Они  охотно поедали корм, движения их были активными, состояние желудочно-кишечного  тракта - в норме (перистальтика умеренная, кал сформировал). Температура, пульс и дыхание в пределах физиологической нормы.

     Через 2 месяца после заражения у поросят подопытной и контрольной группы в течение двух месяцев, с интервалом 10-15 дней, микроскопически исследовали окрашенные по Романовскому-Гимза пробы мышц, взятых у животных методом биопсии на наличие сар-коцист.

     У поросят подопытной группы во всех случаях исследования мышц на 90 день после заражения не установили наличие  саркоцист. Результаты аллергических  и серологических исследований были отрицательны у 9-ипоросят.

     У контрольных животных во всех случаях  результаты иммунологических и микроскопических исследований были положительными.

     Следовательно, в результате проведенных исследований нами выявлена терапевтическая эффективность сульфапиридазина натрия при саркоцистозе свиней.

     Лечение сульфамидом 

     Сульфамид испытывали на 5 животных одной группы (поросят 3-х месячного возраста), инвазированных спороцистами саркоцист от со- бак в дозе 600 тыс.экз. Препарат давали с питьевой водой 120 мг/кг в течение трех дней.

     Для контроля были взяты еще 5 поросят трехмесячного возраста также инвазированные спороцистами саркоцист от собак в аналогичной дозе.

     Результаты  наблюдении показали, что у животных первой группы, обработанных, сульфамидом через 5 дней после заражения- в период проявления первых клинических признаков саркоцистоза на 2-й день после обработки, общее состояние организма улучшилось, они начали охотно принимать корм, реагировать на раздражителя (голос человека). Температурная реакция у животных была в пределах нормы + 38,6 - +33,5°С, частота пульса 86-88 , дыхание - 48-53. Состояние желудочно-кишечного тракта было нормальное ( перистальтика умеренная, кал густой консистенции с признаками формирования). У животных контрольной группы в течение 6-8 суток общее состояние было в пределах нормы, затем появилось угнетение; животные принимали корм неохотно, усилилась жажда, перистальтика была слышна на расстоянии. Температура тела - +40,9 - +41,5°С, пульс 127-129, дыхание 69-78 . На десятый день заболевания общее состояние животных резко ухудшилось.