Гименолепидоз

 

 

Рис. Деформированные яйца карликового цепня, выявляемые при исследовании несвежего кала и представляющие диагностические трудности для лаборанта  (Б. А. Астафьев).

 

 

 

Наиболее эффективны для обнаружения яиц методы обогащения по Калантарян.

Для повышения эффективности лабораторной диагностики рекомендуется накануне исследования вечером назначать фенасал в сниженной дозе (0,5—1 г) вместе с 0,1 г слабительного (пургена). Фекалии для анализа собирают утром. Фенасал разрушает стробилу цепня, в результате чего большое количество яиц попадает в просвет кишечника и выделяется с испражнениями. Поэтому в тех случаях, когда требуется особо тщательное исследование   (среди  контактных,  по  клиническим   показаниям при контрольном анализе после лечения), можно рекомендовать предварительное назначение фенасала.

При лабораторной диагностике  необходимо учитывать периодичность выделения яиц, при этом чем меньше интенсивность инвазии у обследуемого, тем длительность выделения яиц может быть короче, а паузы между этими периодами длиннее. Поэтому при однократном обследовании выявляется только 40—50 % больных и рекомендуется трехкратное обследование с интервалами в 5—7 дней. Анализ крови: признаки анемии, эозинофилия, увеличение СОЭ.

Излеченными считают людей, у которых при повторных (не менее 4—6) анализах в течение 6 мес после  лечения не обнаружены в фекалиях яйца карликового цепня. В упорных случаях гименолепидоза рекомендуется диспансерное наблюдение продлить до 1 года, а число контрольных анализов до 8—10.

 

ОПИСАНИЕ МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГИМЕНОЛЕПИДОЗА.

 

1.           ИССЛЕДОВАНИЕ ИСПРАЖНЕНИЙ

Исследование кала (копрологическое  исследование) в диагностике гельминтозов имеет большое значение, так как многие гельминты паразитируют у человека в кишечнике или органах, с ним связанных, а яйца их выделяются с испражнениями.

Кал для анализа должен быть доставлен  не позже чем  через сутки после его выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.

При осмотре фекалий (макроскопический метод) можно обнаружить гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации.

Небольшие порции кала перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и, просматривая при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой, извлекают гельминтов и все подозрительные образования белого цвета пинцетом или пипеткой. Собранное переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.

При методе отстаивания всю исследуемую порцию фекалий следует размешать с водой в стеклянном цилиндре или горшке, затем осторожно после некоторого отстаивания слить верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают небольшими порциями в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.

Микроскопия (микроскопическое исследование) — основной способ исследования фекалий для обнаружения яиц или личинок гельминтов. С целью повышения достоверности обследования анализы должны быть повторены несколько раз ежедневно или с промежутком в 1—3 дия.

2.          НАТИВНЫЙ МАЗОК

Нативный  мазок — наиболее распространенный и технически доступный метод  исследования фекалий. В нативном мазке  можно, обнаружить яйца и личинки гельминтов всех видов. Однако при небольшом числе яиц в испражнениях их не всегда удается найти. Поэтому исследование кала только при помощи нативного мазка не является полноценным и должно дополняться методами обогащения.

Эффективность исследования нативного мазка заметно  повышается при просмотре четырех препаратов, приготовленных из пробы кала на двух предметных стеклах без покрытия покровными стеклами, что позволяет исследовать в общей сложности примерно такое же количество кала, как и по методу Като.

Для приготовления  большого мазка (Ю. А. Березанцев, Е. Г. Автушенко) 200—300 мг кала (размером с крупную горошину) растирают на стекле размером 6 X 9 см в 15—20 каплях 50 % водного раствора глицерина. Просматривают под бинокулярным  стереоскопическим   микроскопом   (МБС-1   или  МБС-9) в проходящем свете без покровных стекол при увеличении X 12,5, Х4.

В большом  мазке хорошо видны окрашенные крупные  яйца гельминтов, несколько хуже —  прозрачные яйца карликового цепня. Для обнаружения мелких яиц этот метод непригоден. Вместе с тем  большой объем исследуемого материала и большое поле зрения при высокой глубине резкости обеспечивает значительную эффективность указанной модификации по сравнению с обычным нативным мазком.

Методика приготовление нативного мазка кала для исследования на яйца гельминтов

Оборудование: предметные стекла; широкая кювета; лист оконного стекла; деревянные палочки; писчая бумага; ножницы; простой карандаш; 50 % водный раствор глицерина; сосуд с дезинфицирующим раствором; микроскоп.

Методика  работы.

1. На  кювету положить лист оконного стекла.

2.   Нарезать кусочки бумаги  размером  3X4 см  и  написать на  них   порядковые  номера  в соответствии  с  числом   исследуемых проб кала.

3.   На   стекле   разложить   предметные   стекла   из   расчета   2 стекла на одну  пробу кала, под каждую пару стекол подложить номерки.

4.   На предметные стекла в двух  местах нанести пипеткой по 2 капли  50 %   водного раствора  глицерина   (для  его приготовления смешивают равные части глицерина и воды, желательно дистиллированной).

5.  Деревянной палочкой взять кусочек кала размером со спичечную головку  (30—50 мг)   и растереть в капле глицерина  на предметном стекле до получения равномерной суспензии. Таким образом на каждом стекле готовят по два  нативных мазка   (2 препарата), они должны занимать почти всю поверхность стекла, но не сливаться между собой (иначе препарат под микроскопом  «поплывет»)   и не доходить до краев,  чтобы  не испачкать пальцы лаборанта.

Для приготовления  каждого из четырех препаратов палочкой набирают свежий кусочек кала из другой части пробы. Для каждой  исследуемой  пробы  используют только новые  палочки.

6.   Приготовленные препараты, не  накрывая покровными стеклами,   исследуют   под   малым   увеличением   микроскопа   (X Ю, Х8).

7.   По окончании исследования стекла погрузить в дезинфицирующий раствор.

3.          ТОЛСТЫЙ МАЗОК ПО КАТО

Метод Като более эффективен, чем изучение нативного мазка, но также требует  сочетания с  методами обогащения.  Выявляются яйца всех видов гельминтов, однако с целью обнаружения яиц карликового цепня (яйца прозрачные) или описторха (мелкие яйца) лаборант должен быть особо внимательным, чтобы их не пропустить.

Метод основан на обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке кала, просветленном  глицерином и подкрашенном малахитовым зеленым.

Необходимый для приготовления толстого мазка  гидрофильный целлофан нарезают пластинками размером 20 X 40 мм и погружают в смесь Като: 6 мл 3 % водного раствора малахитового зеленого; 500 мл глицерина; 500 мл 6 % раствора фенола. 3—5 мл смеси хватает на 100 пластинок, которые готовы к использованию через сутки и могут храниться в этой же смеси в хорошо закрытой посуде при комнатной температуре в течение 6 мес.

При отсутствии малахитового зеленого (рекомендуется для уменьшения утомляемости глаз лаборанта) и фенола (дезинфицирующее средство) можно пользоваться только 50 % водным раствором глицерина, эффективность исследования не снижается.

Методика приготовления толстого мазка кала с целлофановой пластинкой по Като

Оборудование: широкая кювета; лист оконного стекла; предметные стекла; полоски целлофана, обработанные по Като; крупные резиновые пробки; пинцет; деревянные палочки; бумага; ножницы; карандаш простой; микроскоп.

Методика работы. 1. На листе оконного стекла разложить предметные стекла и под них поместить номерки.

2.  Деревянной  палочкой  набрать  кусочек  кала  размером  с  горошину   (100 мг)   и  поместить  на  предметное стекло  в   центральной его части.

3.   Из банки достать пинцетом  обработанную по Като  пластинку целлофана и наложить на пробу кала на предметном стекле.

4.   Резиновой   пробкой   осторожно   придавить  целлофан   так, чтобы кал  равномерно  распределился  под  ним,  не  вытекая  из края пластинки  (рис. 10.1).

5.   Препарат оставить для  просветления на 60 мин   (в жаркую погоду—на 30—40 мин). Затем микроскопировать. Примечание: а) причиной непрозрачности препарата могут быть толстый слой фекалий, плохая обработка пластинки в смеси Като, недостаточный срок выдержки препарата под целлофаном; б) длительное просветление глицерином и чрезмерное высыхание препарата также затрудняют обнаружение яиц.

4.        МЕТОД ФЮЛЛЕБОРНА

Этот метод — метод обогащения — основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе хлорида натрия, имеющем высокую относительную плотность (1,2), что дает возможность выявления яиц при  неболыцом их количестве. Метод более эффективен, чем изучение нативного мазка, хотя и сложнее. Достоинствами метода являются дешевизна и доступность. Рекомендуется сочетать изучение нативного мазка и метода Фюллеборна.

Однако яйца тениид, неоплодотворенные яйца аскарид не всплывают в данном растворе. Поэтому требуется обязательно исследовать, помимо поверхностной пленки, также и осадок, что усложняет метод. К недостаткам относится и замедленное всплывание яиц ряда гельминтов. Так, если максимальное число яиц карликового цепня всплывает через 15—20 мин, то аскарид — через l,5 — 2 ч, власоглава — через 2—3 ч.

Насыщенный раствор готовят, растворяя 400 г хлорида натрия в 1 л воды при кипении. Фильтруют через слой ваты или марли и охлаждают. Правильно приготовленный раствор должен иметь небольшой осадок кристалликов соли. Готовый раствор хранят в закрытой бутыли.

Методика исследования кала на яйца гельминтов по методу Фюллеборна

Оборудование: предметные стекла; стеклянные широкогорлые банки или стаканы вместимостью 50—100 мл; широкая кювета; лист оконного стекла; спиртовка; спнчки; деревянные палочки; пипетки; бумага; ножницы; карандаш; проволочные петли для снятия пленки (рис. 10.2); насыщенный раствор хлорида натрия, 50% водный, раствор глицерина; микроскоп.

Методика исследования.

1. В эмалированной кювете расставить стеклянные банки или стаканы, под них положить номерки.

2.   В каждую баночку деревянной  палочкой внести 2,5—5 г фекалий.

3.   Постепенно приливая насыщенный  раствор соли, тщательно размешивать фекалии той же палочкой. Раствор налить почти доверху.

4.   Бумажной полоской, согнутой  в виде совка, быстро снять  всплывшие крупные частицы и поместить в банку с дезинфицирующим раствором. Оставить на 45 мин (в учебных целях время отстаивания можно сократить). Отстаивание желательно проводить в вытяжном шкафу.

5.   На листе оконного стекла  разложить предметные стекла — для каждой исследуемой пробы по 3 стекла. На все препараты нанести по 2 капли 50 % водного раствора глицерина.

6.  Спустя 45 мин после начала  отстаивания проволочной петлей, лучше спиралевидной, прикасаются к поверхности раствора в  банке  и  стряхивают  ее  в  каплю  глицерина.  Эту процедуру повторяют, готовя 4 препарата на двух предметных стеклах. Петлю обжигают на спиртовке.

7.   После  снятия  поверхностной   пленки   жидкость   осторожно слить и 4—8 капель осадка пипеткой или проволочной петлей перенести на оставшееся предметное стекло. Готовят таким образом 2 препарата.

8.  Таким образом, из каждой  пробы кала подлежат микроскопическому исследованию 6 препаратов на трех стеклах   (4—из поверхностной пленки и 2—из осадка).

Примечание: вместо снятия пленки петлей можно долить раствор в банке доверху, накрыть предметным стеклом, к поверхности которого пристают всплывшие яйца.

5. МЕТОД Е. В. КАЛАНТАРЯН

Метод исследования по Калантарян также  является методом обогащения, но более  эффективен и проще, чем метод Фюллеборна. Применяется насыщенный раствор нитрата натрия с относительной плотностью 1,38. Поэтому яйца большинства гельминтов всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке, исследование осадка не требуется.

Недостатками метода являются дефицит нитрата натрия, а также то, что яйца трематод, онкосферы тениид не всплывают и остаются в осадке. При длительном (более 1—2 ч) выдерживании фекалий в растворе яйца некоторых гельминтов начинают набухать и оседают, исчезая из поверхностной пленки. Приготовление раствора: 1 кг нитрата натрия (натриевой селитры) растворяют в 1 л воды и кипятят до образования на поверхности пленки и полного растворения соли. Без фильтрования переливают в сухую бутыль. При отсутствии нитрата натрия его можно заменить нитратом аммония (аммиачная -селитра), растворяя 1,7 кг в 1 л воды. Относительная плотность полученного раствора 1,3, что несколько снижает эффективность по сравнению с раствором нитрата натррия.

Методика исследования  кала  на  яйца  гельминтов  методом Калантарян

Оборудование: стеклянные широкогорлые банки или стаканы вместимостью 50—100 мл; предметные стекла; широкая кювета; лист оконного стекла; деревянные палочкн; пипетки; бумага; ножницы; карандаш; насыщенный раствор нитрата натрня; 50 % раствор глицерина; микроскоп.

Методика работы. 1. В стеклянную банку или стакан деревянной палочкой внести 2,5—5 г фекалий.

2.   Банку поместить в эмалированную  кювету, под нее положить листок бумаги с номером.

3.   Постепенно  приливая  насыщенный  раствор  нитрата  натрия, тщательно размешать фекалии. Уровень жидкости довести почти доверху.