Туберкулез

практического применения не нашли.

Материалом для  микроскопического, бактериологического  исследований и

биопробы, в зависимости  от локализации процесса, служат, гной, спиномозговая

жидкость, моча, испражнения, которые собирают в стерильную посуду ( мокроту в

баночки, спинномозговую жидкость и другие материалы в  пробирки).

     Метод гомогенизации. Суточную порцию мокроты выливают во флакон

или банку, добавляют  равный объем 1% водного раствора едкого натрия, плотно

закрывают резиновой пробкой и энергично встряхивают до полной гомогенизации (

10-15 мин.). Мокроту,  утратившую вязкость, центрифугируют, жидкость сливают,

осадок нейтрализуют добавлением 2-3 капель 10% раствора соляной  или 30%

раствора уксусной кислоты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по

Цилю-нильсену.

     Метод Флотации. Суточную или двухсуточную порцию мокроты

гомогенизируют  обычным способом. Для того чтобы  не осталось слизистых комочков,

банку с гомогенизированной мокротой помещают на 30 минут в водяную  баню при 55

градусах. Затем  добавляют 1-2 мл. ксилола ( можно вместо ксилола добавить

бензол, бензин и т.п.) и встряхивают в течении 10 минут, а затем отстаивают 20

минут при комнатной  температуре. Капельки ксилола с  адсорбированными микробами

всплывают, образуя сливно-образный слой, его снимают пипеткой и наносят на

предметное стекло, помещенное на стеклянную пластинку, нагретую над водяной

баней до 60 градусов. Высохший мазок покрывают новой  порцией сливкообразного

слоя, и так  до тех пор, пока будет перенесен на стекло весь флотационный слой.

Препарат фиксируют  и окрашивают по Цилю-Нильсену.

     Бактериологический метод является более эффективным и применяется

в тех случаях, когда бактериоскопическое исследование не дало положительных

результатов.

К исследуемому материалу добавляют двойной объем 6% раствора серной кислоты,

встряхивают в  течении 10 минут. Затем центрифугируют в стерильной пробирке,

жидкость сливают, осадок нейтрализуют добавлением 1-2 капель 3% раствора

едкого натрия или отмывают несколько раз изотоническим раствором и сеют.

Фекалии обрабатывают 4% раствором едкого натрия, смесь  помещают в термостат

на 3 часа, центрифугируют и осадок нейтрализуют 8% раствором  соляной кислоты,

после чего сеют в специальные среды:

1) Глицериновый  картофель по Павловскому.

2) Среда  Петраньяны.

3) Синтетическая  среда Сотона.

Также материалы, как спинномозговая жидкость, экссудат, гной, кровь

предварительной обработке не подвергается, их наносят  пипеткой на питательную

среду, затем  платиновой петлей тщательно втирают, распределяя по всей

поверхности среды. Ватные пробки заливают парафином, посевы помещают в

термостат при 37 градусах и выдерживают в течении 6-8 недель. Рост появляется

на 10-30-й день в виде отдельных колоний, значительно  возвышающихся над

поверхностью среды, морщинистых, суховатых, с неровными краями.

     Ускоренные методы бактериологической 

     диагностики туберкулеза.

     Глубинный рост в гемолизированной крови. В пробирки с цитратной

кровью сеют те же выделения, обработанные серной кислотой и промытые

изотоническим раствором. Через 6-8 дней пребывания в  термостате среду

центрифугируют  и из осадка делают мазки.

     Аллергический метод применяют главным образом для определения

инфицирования микобактериями туберкулеза Положительная  аллергическая реакция на

введение туберкулина  подтверждает заражение туберкулезом, но не характер

процесса. Эту  реакцию применяют в диагностике  туберкулеза у детей, кроме того,

перед вакцинацией  наряду с клиническими исследованиями ставят обязательно и

аллергические реакции: кожную пробу Пирке и внутрикожную Манту.

     Серологический метод. Реакцию связывания комплемента Барде-Жангу

для диагностики  применяют редко.

В настоящее  время в качестве быстрой диагностики  туберкулеза применяют 

люминесцентную  микроскопию. Этот метод увеличивает количество

положительных результатов. Препарат окрашивают ауромином  в разведении 1:1000,

после чего обесцвечивают  соляно кислым спиртом и докрашивают  кислым фуксином,

который ‘’ гасит’’  свечение элементов тканей, слизи  в препарате.

Научные исследования в области туберкулёза открывают новые возможности профилактики, диагностики и лечения этой болезни. За время, прошедшее после первого издания настоящего руководства в 1981 г., получены новые данные, касающиеся диагностики и дифференциальной диагностики туберкулёза и других заболеваний лёгких. Значительно изменилась на этот период методика химиотерапии больных туберкулёзом. Накоплен опыт противотуберкулёзной работы в новых организационных формах. Изменились представления о значении туберкулёза как международной проблемы в развивающихся странах Африки, Азии, Латинской Америки, где заболеваемость туберкулёзом и смертность от него не уменьшаются. Вопреки мнению ряда зарубежных учёных, существовавшему более 20 лет, туберкулёз вовсе не «исчезающая» болезнь: она требует энергичных, действенных противотуберкулёзных мероприятий; если же их не проводить в должной мере, то заболеваемость увеличивается, появляются более тяжёлые формы туберкулёза.

Совершенствование новых  форм диагностики туберкулёза и  нетуберкулёзных заболеваний органов дыхания вызвало необходимость осветить вопросы радинуклидных исследований при лёгочной патологии, при клиническом проявлении пороков развития бронхолёгочной системы.

Научные исследования в области фтизиатрии ежегодно пополняют наши представления о патогенезе туберкулёза, постоянно совершенствуются методы диагностики и лечения. Особенно интенсивные исследования проводятся в области иммунологии и иммуногенетики.

Значительно меньше научных разработок по профилактике туберкулёза, в том числе по вакцинации и химопрофилактике, особенно в плане создания и внедрения в практику новых вариантов вакцин, в частности, на основе гибридомной технологии, химиопрепаратов с замедленным выведением из организма человека, пригодных для применения один раз в 10-14 дней и реже при химопрофилактике.                   

Основная часть.

Возбудитель туберкулеза  и его свойства.

Типичным представителем рода микобактерий являются микобактерии тонких, слегка изогнутых, гомогенных или зернистых палочек длинной  от 0,8 до 3-5 мкм и шириной от 0,3 до 0,5 мкм. Форма и зернистость микобактерий хорошо видны в окрашенных препаратах. Особенности клеточной структуры микобактерий туберкулёза удаётся обнаружить при помощи такиъх методов цитологического исследования, как электронография, люминичцентрая, фазово-контрастная микроскопия и др.

Совершенствование способов фиксации, техники ультратонких срезов и увеличение разрешающей способности  электронного микроскопа позволили  установить ультраструктуру микобактерий и определить локализацию в ней отдельных органоидов. В бактериальной клетке дифференцируется клеточная мембрана, цитоплазма с отдельными органоидами и ядерная субстанция.

Химический  состав микобактерий туберкулёза.

В состав клетки  входят вода (85,9%), белки, углеводы, липиды и минеральные соли. Липиды составляют от 10 до 40% сухого вещества. Они растворимы в спирту, эфире и хлороформе. Белковый компонент – различные Туберкулопротеины – составляют 56% сухого вещества клетки. Туберкулопротеины разделяются по своим физико-химическим свойствам на 3 типа: с высокой молекулярной массой (32000-44000) – хорошо растворимые, биологически активные; со средней молекулярной массой (16000) – менее растворимые, менее биологически активные; с низкой молекулярной массой (9000) – нерастворимые, наиболее тесно связанные с нуклеиновой кислотой, образующие комплексы – нуклеопротеиды. В состав туберкуло-протеинов входят почти все известные аминокислоты.

В микобактериях туберкулёза  содержится до 15,3% углеводов большей  частью в виде полисахаридов, свободных и в соединениях с фосфатидами и белками.

Минеральные вещества микобактерий туберкулёза составляют около 6% массы клетки. Это кальций, фосфор, магний, калий, железо, цинк и  марганец в основном в виде соединений.

Питательные среды.

Для нормального развития микобактерии требуются специальные питательные среды, содержащие углерод, азот, водород, кислород, фосфор, магний, калий, а также железо, хлор, натрий, серу. Кроме того, для полноценного развития микобактерий туберкулёза, как и других микроорганизмов, необходимо наличие факторов роста, которые в минимальных количествах улучшает рост бактерий на средах, содержащие основные питательные вещества. Факторы роста не входят в состав ферментных систем клетки, но используются для их построения. Известны факторы роста, родственные по своей природе витаминам группы В, ряд аминокислот, органических кислот и липидов. Все эти факторы содержаться в полноценных средах – яичных, кровяных, картофельных.

Первичные культуры микобактерий, выделенные из патологического материала, особенно чувствительны к отсутствию факторов роста. По-видимому, при вегетировании в тканях организма они теряют способность самостоятельно синтезировать такие вещества. Следовательно, для таких культур необходимы полноценные питательные средства.

Для культивирования  и дифференциации микобактерий туберкулёза  используется большое количество разнообразных  по составу и консистенции питательных  сред. По составу их можно разделить  на три группы: среды, содержащие глицерин; белковые средства среды (сывороточные, яичные, желтковые); синтетические    (безбелковые) среды. Более полноценными являются смешанные среды, которые применяют для выделения культур из патологического материала. По консистенции среды делят на твёрдые, полужидкие и жидкие.

При культивировании микобактерий на питательных средах большое значение имеет концентрация в среде водородных ионов (pH). Наилучший рост культур отмечается при pH 6,8-702. Микобактерии могут расти при более кислой реакции (pH 5.5) и при более щелочной (pH 8.0), однако менее интенсивно

Ферментативная активность.

Микобактерии туберкулёза  для синтеза белков клеточной  мембраны, цитоплазмы и органоидов и для биоэнергетических процессов  используют различные органические соединения, что указывает на их значительную и разнообразную ферментативную активность.

Как известно, внутриклеточное  дыхание микобактерий осуществляется оксидоредуктазами. К этой большой  группе окислительно-восстановительных  ферментов относятся дегидрогеназы, оксидазы, а также каталаза и пероксидаза. Особый интерес представляют каталаза и пероксидаза, поскольку с ними интимно связанны такие биологические свойства микобактерий туберкулёза, как вирулентность и лекарственная устойчивость к препаратам группы гидразидов изоникотиновой кислоты. У всех аэробных микроорганизмов завершающим продуктом окислительно-восстановительных процессов является перекись водорода. Каталаза расщепляет перекись водорода на воду и кислород. Пероксидаза катализирует окисление перекисью водорода ряда фенолов и ароматических аминов.  

Дыхание.

Для нормального развития микобактерии туберкулёза нуждаются  в кислороде, поэтому их относят  к аэробам. Большинство исследователей считали возбудителя туберкулёза  абсолютным аэробом. Работы Л.М.Моделя (1952) и др. показали возможность роста  микобактерий туберкулеза при недостатке или отсутствии кислорода. Это обстоятельство позволяет рассматривать микобактерии туберкулёза как факультативные аэробы. Однако вопрос о факультативной аэробности возбудителя остаётся до сих пор не решённым. Исследователи при конструировании новых питательных сред придерживается принципа максимальной аэрации растущей популяции.