Диагностика гельминтозов

Дигностика гельминтозов

Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (члеников, головок, обрывков стробилы), личинок и яиц исследуют кал, мочу, мокроту, ректальную и перианалную слизь, дуоденальное содержимое, кровь. Материал для исследования берется в зависимости от подозрения на наличие того или иного гельминта

ИССЛЕДОВАНИЕ  ИСПРАЖНЕНИЯ

Исследование кала (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, с ним связанных, а их яйца выделяются с испражнениями.

Макроскопический  осмотр фекалий

Осмотр фекалий производят с целью обнаружения крупных  гельминтов, их члеников, обрывков стробилы, головок, выделяющихся самопроизвольно  или после дегельминтизации. Для этого небольшие порции кала перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и, просматривая на темном фоне, извлекают гельминтов пинцетом или пипеткой, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина для дальнейшего изучения.

Можно всю исследуемую  порцию фекалий несколько раз  размешать с водой в стеклянном цилиндре или горшке, ведре, поочередно осторожно сливая верхний слой отстоявшейся жидкости. После того как после  очередного взмучивания и отстаивания  жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают небольшими порциями в стеклянной ванночке или чашке Петри на темном фоне. Такое исследование называется методом отстаивания.

Микроскопия испражнений

Это основной метод исследования фекалий для обнаружения личинок или яиц гельминтов. При этом применяют различные методы.

Испражнения для анализа  должны быть доставлены не позже суток  после их выделения, а при подозрении на стронгилоидоз (т. е. для обнаружения личинок) — немедленно. При нарушении этого правила диагноз в связи с разрушением яиц или личинок нередко поставить затруднительно или невозможно.

Для повышения достоверности  исследования анализы нужно повторять  несколько раз (ежедневно или  с промежутками в 1—3 дня).

Нативный мазок

Небольшой кусочек кала переносят  палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество воды и чистого глицерина), растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка (два препарата), всего просматривают не менее двух стекол, т. е. 4 препаратов.

При небольшом количестве яиц в испражнениях этим методом  выявить их не всегда удается, т. е. могут  быть: получены ложноотрицательные результаты. Поэтому исследование кала на яйца гельминтов только методом нативного мазка не является полноценным и достоверным.

 

 

Мазок с целлофаном по Като

По методу японского ученого  К. Като 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, покрывают специально обработанной полоской целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы фекалии не растеклись из-под целлофана.

Этот метод позволяет  исследовать гораздо больший  объем фекалий и с гораздо  большей эффективностью, чем при  обычном нативном мазке. Исследование (при малом или среднем увеличении микроскопа) необходимо проводить не позже чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду — через 30—40 мин. Чрезмерное высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопию.

Метод закручивания по Шульману

Этот метод служит в  основном для обнаружения в кале личинок гельминтов, в первую очередь стронгилоида, но можно выявить и яйца гельминтов. В небольшой баночке 2—3 г фекалий заливают пятикратным количеством воды и стеклянной палочкой очень быстро размешивают, стараясь не задевать стенки баночки. Затем палочку быстро вынимают и образовавшуюся на ее конце каплю жидкости переносят на предметное стекло для микроскопии. Следует только помнить, что исследовать нужно свежевыделенные испражнения.

Метод Фюллеборна

Этот метод эффективнее, чем просмотр только нативного мазка, хотя и сложнее. Являясь методом обогащения, дает возможность выявления яиц даже при небольшом их количестве. Предварительно готовят насыщенный раствор поваренной соли (хлористого натрия), растворяя 400 г ее в 1 л воды при кипении. Хранят его в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в  баночку (объемом 30— 50 мл) помещают 2—3 г фекалий и при помешивании  палочкой доливают доверху насыщенным раствором соли. Полоской бумаги тут же снимают всплывшие крупные частицы. Через 45—60 мин проволочной петлей снимают поверхностную пленку и стряхивают ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина, готовя таким образом 4 препарата на двух стеклах. Для выявления яиц анкилостомид пленку рекомендуют снимать раньше — через 10—20 мин и исследовать фекалии не позднее первых суток после их выделения. Проволочную петлю после каждого анализа прожигают на спиртовке.

Способом Фюллеборна хорошо обнаруживаются яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентецов. Яйца же трематод и тениид всплывают плохо. Поэтому дополнительно просматривают 2—4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.

К недостаткам этого метода относится необходимость просмотра  препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

Метод Калантарян

Отличается от метода Фюллеборна только тем, что вместо раствора поваренной соли для приготовления насыщенного раствора применяют азотнокислый натрий, килограмм которого заливают 1 л воды и кипятят.

Техника анализа такая  же, как и по Фюллеборну. Отличие заключается в том, что при методе Калантарян благодаря большой относительной плотности раствора всплывают яйца всех видов гельминтов, и осадок поэтому исследовать не нужно. Срок отстаивания также короче, всего 20—30 мин. Неудобство метода еще состоит в том, что раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется, что затрудняет его просмотр.

Во всех случаях рекомендуется  вместо снятия пленки петлей накрывать  уровень жидкости предметным стеклом (как было описано выше), что обеспечивает выявление яиц даже при низкой степени инвазии. Доказано, что количество яиц, снимаемых стеклом, больше, чем снимаемых петлей, и значительно выше по сравнению с нативным мазком. Следует учитывать также, что чем выше температура в помещении, тем быстрее всплывают яйца гельминтов.

Вместо стекла на поверхность  жидкости, в которой отстаивается проба фекалий, можно помещать квадратики отмытой от эмульсии рентгеновской пленки и предварительно выдержанной сутки в 50% глицерине.

Метод обогащения с детергентами.

Сбор фекалий проводят во флаконы с плотно закрывающейся пробкой (объемом на 50—100мл), куда предварительно до половины объема наливается 1 % водной раствор порошка «Лотос» или 1 — 1,5% раствор порошка «Экстра». Доставленную пробу фекалий размешивают встряхиванием, отстаивают 30 мин, а затем центрифугируют 5 мин при 1000—1500 оборотах. Из осадка готовят не менее двух препаратов на предметном стекле и микроскопируют. Пробы, постоявшие в лаборатории сутки и больше, пригодны для исследования без центрифугирования.

Можно использовать и другие порошки, берется такое их количество, чтобы оно полностью растворялось в воде.

Этим методом выявляются яйца всех видов гельминтов, эффективность метода равна примерно эффективности метода Калантарян.

Консервация яиц  гельминтов

Лаборантам или паразитологам  приходится выезжать в населенные пункты сельской местности для массового  обследования населения на гельминтозы. Однако микроскопия испражнений на месте не всегда возможна. Кроме того, в практике работы встречаются случаи, когда выявленныё яйца гельминтов (или образования, их напоминающие) необходимо сохранить или направить на консультацию.

Для сохранения фекалий и  содержащихся в них яиц гельминтов на длительный срок применяют консерванты. А. А. Красильников (1970) рекомендует  использовать в качестве консервантов моющие синтетические средства (детергенты). Это, в частности, 1 % раствор «Лотоса» или 1,5% раствор «Экстры». Одну часть  фекалий, заливают пятикратным объемом  одного из указанных; растворов, в которых  яйца и личинки гельминтов сохраняются  не менее 6 месяцев. Раствор консервантов можно готовить заранее.

При необходимости сохранить  препарат, приготовленный на предметном стекле в 50% глицерине, его накрывают покровным стеклом, края которого заливают конторским клеем и подсушивают два часа. Это обеспечивает сохранение яиц до нескольких недель (методика Е. М. Зазуляк).

Возможные ошибки при    микроскопии испражнений

В процессе микроскопии испражнений  могут встретиться различные образования, напоминающие яйца гельминтов или их личинки.

Так, иногда пузырьки воздуха  принимают за онкосферы тениид. Пузырьки — круглые, толщина «оболочки» и диаметр их различны, внутренняя часть совершенно прозрачна и лишена структуры, ободок черного цвета. Жировые капли также отличаются разнообразием размеров и бесструктурностью, хотя некоторые своей продолговатой формой могут напоминать яйца остриц.

Более сложной является дифференциация растительных клеток, спор и пыльцы растений, пищевых частиц и I других возможных включений. Растительные волоски I могут быть приняты за личинок гельминтов. Указанные I включения и частицы могут содержаться в испражнениях, а -также попасть в них во время приготовления препаратов.

Во всех сомнительных случаях  необходимо учитывать размер, строение оболочек, цвет и морфологию обнаруженных образований, в случае необходимости проводить повторные анализы.  Некоторые подобные образования представлены на рис. 84. 

 

ИССЛЕДОВАНИЕ  МЕТОДОМ СОСКОБА

(НА ЭНТЕРОБИОЗ  И ТЕНИАРИНХОЗ) 

 

 

 Для выявления яиц остриц и бычьего  цепня применяют специальные  методы исследования.

Соскоб с перианальных складок.

Небольшой деревянной палочкой или спичкой с  туго; намотанным на конце ватным тампончиком, смоченным, 50% глицерином, производят осторожное соскабливание с перианальных складок. Затем палочку с тампоном помещают в сухую небольшую пробирку или на предметное стекло, закрепив резиновым кольцом. В лаборатории тампон смывают поочередно в 4 каплях 50% глицерина, помещенных на два предметных стекла, и микроскопируют.

Более полные результаты получаются, если тампон покрывают сверху капроном, а после соскоба помещают в  пробирку с водой. В лаборатории  тампон ополаскивают в этой же жидкости, после чего ее центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Недостаток метода в его громоздкости.

Диагностика энтеробиоза  с использованием метода «липкой  ленты» (метод Грэма).

В настоящее время  в практике здравоохранения для диагностики энтеробиоза широко применяется метод «липкой ленты». Согласно этому методу, соскоб с перианальных складок производится липкой прозрачной лентой с последующей микроскопией.

Диагностика энтеробиоза  с использованием модифицированного  метода                  «липкой ленты».

Существующие методы диагностики  энтеробиоза недостаточно эффективны, так как не позволяют выявить  эту инвазию у всех членов коллектива. Сотрудниками кафедры разработано  одноразовое диагностическое устройство, которое позволяет значительно  повысить выявляемость энтеробиоза, и обладает рядом положительных качеств в сравнении с известными методами диагностики (патент на изобретение РБ № 2202, Н.Н. Острейко, Л.П. Гаврилова, Е.М. Бутенкова, И.В. Кондрашова, И.В. Фадеева, С.Н. Боброва). Проведено сравнительное испытание устройства с методом «липкой ленты», применяемым в практике здравоохранения. Оно представляет собой прозрачную полистироловую пластинку, выполняющую одновременно функции шпателя и предметного стекла. Одна из сторон пластины покрыта липкой лентой.

Устройство снабжено этикеткой, где указаны данные обследуемого ребенка и дата взятия анализа, а  также инструкцией по его применению.

С помощью устройства, обследуемые или их родители могут самостоятельно производить забор материала сразу после ночного сна, что повышает выявляемость и экономит время работы медперсонала. Предлагаемый метод диагностики энтеробиоза прост в применении, позволяет быстро и качественно получать материал для исследования, сводит к минимуму контакт медицинского персонала с инвазионным материалом, обладает высокими диагностическими качествами и может быть рекомендован для широкого внедрения в лечебно-профилактических учреждениях. Устройство апробировано и внедрено в оториноларингологическом отделении Гомельской областной детской клинической больницы. Сравнительный анализ методов диагностики показал, что при обследовании детей одноразовым диагностическим устройством выявляемость энтеробиоза была достоверно выше по сравнению с традиционным методом «липкой ленты».

Подногтевой соскоб

Этот метод исследования применяется не столько для выявления  больных, сколько для изучения степени  их чистоплотности и загрязненности рук, так как не всегда наличие  яиц на руках свидетельствует  об инвазированности обследуемого лица.

Края ногтя, ногтевое ложе и подногтевое пространство протирают ватным тампоном, смоченным 1% раствором едкого натра или калия, тампон затем помещают в пробирку. После центрифугирования с этой же жидкостью осадок исследуют под микроскопом.

Соскоб можно брать  также и отточенной спичкой, смоченной 50% глицерином. После ее обмывания  на предметном стекле в капле водного  глицерина, препарат микроскопируют.