Возбудитель пастереллеза птиц

Четыре капсульных типа Pasteurella multocida обозначены через А, В, D и Е. Серовару соответствует арабская цифра, указывающая на соматический, или О, тип.

Ни одна из существующих систем идентификации соматических антигенов полностью не удовлетворяет специалистов, особенно в отношении количества и разновидностей антигенных детерминант, ассоциированных с эндотоксином.

Pasteurella multocida состоит более чем из 16 сероваров, некоторые из них ассоциированы с определенными видами животных и птиц и симптомами болезни. Серовары А:1 и А:3 являются возбудителями пастереллеза птиц.

Точная природа антигенов Pasteurella multocida полностью не изучена. Современные представления об основных компонентах, ассоциированных с капсульным веществом, можно резюмировать так:

1) β-антиген - типоспецифический  полисахарид, адсорбируется на эритроцитах в реакции непрямой гемагглютинации; встречается в микроорганизмах, которые дают флуоресцирующие и мукоидные варианты;

2) d-комплекс - вероятно, полисахаридно-белковый, тесно прикрепляющийся к клеточной стенке, иммуногенный, видимо, в некоторой степени лабильный;

3) γ-антиген - липополисахарид, встречающийся в микроорганизмах всех вариантов, составляет клеточную стенку; у каждого одна или более антигенных детерминант, ответственных за различные О-, или соматические, серовары.

Следует отметить, что исследования морфологии, цитологии, биохимии, физиологии пастерелл многочисленны и неоднозначны. В дальнейшем изучать иммуногенные и физико-биохимические особенности микроорганизма целесообразно комплексно, поскольку такой подход дает возможность определить критерии оценки культуры in vitro, что важно при создании вакцинно-сывороточных препаратов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Бактериологическая диагностика

Прижизненная бактериологическая диагностика пастереллеза не имеет  большого значения, чаще исследуют  материал от павших птиц. Результаты лабораторного  исследования этого материала дают возможность уточнить первоначальный диагноз.

Бактериологическое исследование состоит из следующих моментов:1) микроскопия мазков из крови или мазков-отпечатков из пораженных органов; 2) выделение культуры возбудителя путем посева крови сердца, суспензии из органов костного мозга на питательные среды; 3) выделение культуры пастерелл путем заражения лабораторных животных и птиц; идентификация выделенной культуры и изучение ее вирулентности, которое особенно необходимо при выделении культуры пастерелл от птиц болеющих хроническим пастереллезом, и бактерионосителей.

Биологическую пробу на пастереллез  ставят на белых мышах, либо на голубях, или на курах. Кролики также очень  восприимчивы к пастереллам, но ставить  биопробу на них вряд ли целесообразно, так как они часто являются спонтанными пастереллоносителями.

Лабораторных животных и  птиц заражают суспензией из паренхиматозных  органов подкожно или внутримышечно  в дозе 0,2-0,5 мл.

В мазках из патологического  материала и особенно крови (ценно для дифференциации от тифа, чумы и других болезней) при пастереллезе находят короткие с закругленными краями овоидные палочки с выраженной биполярностью. Обнаружение в мазках биполярных овоидов - ценный диагностический признак, но, кроме пастерелл, биполярную окраску могут давать и другие бактерии (E. Coli и д.р.), в то же время в некоторых случаях пастереллы не дают четкой биполярности при окраске. Необходимо также строго соблюдать технику окраски.

Учет результатов биопробы проводят в срок до двух-трех дней предварительный и окончательный не позже 5 дней после гибели опытных животных (птиц). Отрицательный ответ - после 10-дневного наблюдения за подопытными животными (птицами). Важно правильно оценить рост культуры на МПА, так как это позволяет судить об антигенных и вирулентных свойствах изучаемой культуры еще до проведения точных исследований. Морфологию колоний целесообразно учитывать так, как указано выше (S-формы, M-формы, R-формы).

Гибель животных, зараженных суспензией патологического материала из паренхиматозных органов или чистой культурой возбудителя, в зависимости от вирулентности штамма наступает в разные сроки. Достаточно вирулентные штаммы вызывают гибель голубей, кур, белых мышей чаще в течении первых суток, редко- двух суток.

Павших подопытных животных и птиц вскрывают, делают посевы из крови сердца, паренхиматозных органов  на простые среды, готовят и окрашивают мазки, микроскопируют их с последующей идентификацией культуры.

У подопытных животных и  птиц при патологоанатомическом исследовании обнаруживают типичные для пастереллеза признаки, особенно у птиц; у белых мышей - воспалительный очаг на месте инъекции, отечности подкожной клетчатки и мускулатуры, кровоизлияний на эпикарде, увеличенные и отечные лимфатические узлы.

Изолированные и идентифицированные культуры пастерелл необходимо проверять на патогенность и вирулентность, которая у различных штаммов неодинакова.

Особенно важно вирулентность  выделенных штаммов установить у птиц-пастереллоносителей, имеющих большое эпизоотическое значение. С этой целью подопытных птиц или белых мышей заражают подкожно или внутримышечно разными дозами изучаемого штамма и в результате определяют среднюю летальную дозу, при которой погибает 50% птиц или белых мышей, взятых в опыт (LD50), при разных способах заражения. Голубей или цыплят целесообразнее заражать внутримышечно, а белых мышей подкожно, различными разведениями пастереллезных культур.

Дифференциальная диагностика

Важное значение имеет правильная идентификация выделенной культуры и дифференциация ее от сходных микроорганизмов, главным образом от возбудителя  пуллороза, листериоза.

Таблица 1

Возбудитель	Подвиж- ность	Капсула	Сероводород	Индол	Редукция нитратов
Пастереллеза	----------	Есть у свеже-выделенных вирулентных штаммов	Образует небольшое количество	+	Положи-тельная
Пуллороза	----------	----------------	Образуют не все штаммы	---	Отсутствует
Листериоза	Подвижен только в молодых культурах	----------------	----------------	---	Отсутствует

 

 

 

 

Продолжение таблицы 1.

Возбудитель	Проба на  каталазу	Патогенность  для  лаб-ных животных (птиц)	РА с позитивной сывороткой
Пастереллеза	Положит.	Белые мыши+, голуби+, морские свинки+ (при внутри- брюшинном заражении)	Имеет очень малое значение ввиду отсутствия стандартных сывороток
Пуллороза	Отрицат.	Белые мыши+, голуби и морские свинки непостоянно	Положительная с пуллорной сывороткой
Листериоза	Положит.	Белые мыши+, морские свинки+, голуби-	С листериозной сывороткой положительная

 

При постановке диагноза необходимо пастереллез птиц дифференцировать от других заболеваний. Таких как спирохетоз, , стрептококкоз. При заболевании водоплавающей птицы пастереллез дифференцируют от инфлюэнцы.

Надежная дифференциация пастереллеза от других болезней возможна лишь при оценке комплекса данных по эпизоотологии, клинической и особенно патологоморфологической картине, бактериологическому и другим лабораторным методам исследования.

Спирохетоз птиц отличается от пастереллеза тем, что при исследовании мазков крови под микроскопом  при спирохетозе находят спирохеты, а при пастереллезе биполярно окрашенные овоиды. Различны также результаты бактериологического исследования, биопроб. При спирохетозе не находят картину сепсиса на вскрытии. Распространение этой болезни ограниченно (в зоне с теплым климатом).

Инфлюэнца. У утят и гусят  острый пастереллез нужно дифференцировать от инфлюэнцы, которая часто поражает гусят. У павших гусей обнаруживают серозно-фибринозный перикардит, фиброзный перитонит и перигепатит, увеличение селезенки, а иногда и аэросаккулиты. В отличии от пастерелл возбудитель инфлюэнцы в первых генерациях не растет или очень плохо растет на простых питательных средах. Кролики и мыши не восприимчивы к инфлюэнце.

Стрептококкоз. Острый стрептококкоз  может протекать по типу геморрагической септицемии, а хронический - с поражением бородавок и подошв. Эти признаки сходны с таковыми при пастереллезе. Выделение при бактериологическом исследовании стрептококков и проверка их вирулентности на цыплятах позволяют уточнить диагноз.

Дифференциальная диагностика  хронического пастереллеза и его локализованных форм (ринит, артрит, конъюнктивит и т.п.) от аналогичных незаразных болезней не вызывает трудностей.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Серологическая диагностика

Применяется реакция агглютинации (РА).

Ценные данные реакции  агглютинации получают при идентификации  пастерелл и установлении их различных  серотипов, в особенности если в реакции используют высокоактивные сыворотки, полученные гипериммунизацией кроликов или крупного рогатого скота штаммами пастерелл, выделенными от птиц.

РА ставят по общепринятой методике в пробирках на формалинизированном фосфатном буфере с разведением сывороток 1:10, 1:20 и т.д. дозировка компонентов для реакции такова: 0.5 мл сыворотки + 1 мл взвеси антигена.

Реакцию учитывают после  инкубирования в течение 18 часов при 370 С и выдерживания в термостате в течение 4-5 часов при комнатной температуре.

 Контролями антигена  служат буферный раствор и  нормальная кроличья сыворотка.  Антиген считается непригодным  для реакции, если в одном  из контролей наблюдают агглютинацию.

 

 

 

 

 

 

 

 

Аллергическая диагностика

Для прижизненной диагностики  хронически протекающего пастереллеза птиц микробоносительства этого микроба некоторыми авторами были испытаны аллергические препараты, но положительных результатов в производственных условиях не было получено.

В последнее время вопросы  аллергической диагностики пастереллеза птиц не изучаются, и в связи с  ежегодной заменой поголовья маточных стад вновь выращенным молодняком вряд ли в этом есть необходимость.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Специфическая профилактика заболевания

Иммунопрофилактика пастереллезов  занимает одно из основных мест в системе  противоэпизотологических мероприятий. В нашей стране против пастереллеза птиц выпускают следующие:

- инактивированные вакцины против пастереллеза птиц:

* инактивированная сорбированная вакцина против        пастереллеза птиц

* эмульсинвакцина против пастереллеза птиц;

- сухая живая вакцина против пастереллеза водоплавающих птиц из штамма «К» Краснодарской НИВС;

- сухая живая вакцина против пастереллеза птиц из штамма «АВ»

 Краснодарской НИВС;

- сухую вакцину против  пастереллеза птиц из пастеровского штамма.

Инактивированная  вакцина. Представляет капельную фракцию пастерелл. Препарат обладает выраженным противоэпизоотическим эффектом в течении 10 месяцев после вакцинации.

Чаще всего для инактивирования пастерелл используют формалин в концентрации 0,1-0,3%. Наряду с формалином испытаны мертиолят, бетапропилактат, неомицин, глутаральдегид, азид натрия, спирт, йод, красители.

Применение инактивированных вакцин безвредно, обеспечивает создание иммунитета у птиц, однако не всегда достаточно напряженного.

Живые вакцины. В результате селекции был отобран авирулентный штамм, который использовали в качестве вакцины в виде нативной полужидкой культуры, выращенной глубинным способом в реакторе. Опытным путем установили, что этот штамм формирует у кур иммунитет продолжительностью до 3 месяцев. Из данного штамма изготовили вакцину для практического применения с ограниченным сроком годности (45 дней).

Был разработан глубинный метод культивирования пастерелл в реакторах в питательной среде на основе перевара Хоттингера с периодическим добавлением источников питания, последующей концентрацией бактериальной суспензии и лиофилизацией. Получили сухую авирулентную вакцину против пастереллеза со сроком годности 10 месяцев.

Имеются сведенья о получении формолвакцины против пастереллеза птиц. При культивировании штаммов приготавливали разные комбинации ферментативных (панкреатических) гидролизатов - казеина (ПГК), рыбной муки(ПГРМ) и крови крупного рогатого скота (ПГКр) с солевыми добавками. Об эффективности питательных сред судили по наращиванию биомассы через определенные отрезки времени. Посевы каждого штамма делали после соответствующего контроля на МПА.

Также в 2005 году Таджикский НИВИ разработал и изготовил новый  синтезированный препарат САП-2 - смесь S(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадизоло [3,2-а] пиримидин-2-ил) - изотиурон гидробромида с сахарозой (1:1), обладающий антибактериальной активностью.

Изучение профилактической эффективности САП-2 при пастереллезе показало, что применение САП-2 и  норфосульфазола способствовало улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела.

 

 

 

Специфическая терапия больных  животных

Специфическая терапия при  пастереллезе птиц не разработана

У переболевших птиц образуется нестерильный иммунитет. После вакцинации птицы могут оставаться пастереллоносителями.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Заключение

Вспышки пастереллезов наносят  огромный экономический ущерб птицефабрикам. Благодаря исследованиям последних  лет выделенные микроорганизмы могут  быть достоверно охарактеризованы по наличию антигенов. Борьба с пастереллезом эффективна лишь при лечебно-профилактических мероприятиях по уничтожению возбудителя болезни во внешней среде и повышению общей и специфической резистентности птиц.