Микробиологический анализ кормов

    2. Высев суспензии на элективные среды (приложение 1) проводят по 1 мл суспензии – при глубинном посеве, по 0,05-0,1 мл суспензии при посеве в жидкие среды.

    3. Определение количества  молочнокислых бактерий проводят на капустном агаре с мелом (среда 1) и на капустном агаре со спиртом и мелом (среда 2) – глубинный посев.

    Подсчет колоний молочнокислых бактерий на капустном агаре с мелом  проводят на 5-6 день, а на капустном агаре со спиртом и мелом – на 7-10 день (при 28⁰).

    Среда 2 необходима для выявления молочнокислых  бактерий в составе эпифитной  микрофлоры и свежих (с высоким содержанием сухого вещества) силосов, так как спирт заметно тормозит рост посторонней микрофлоры.

    4. Количество посторонней  микрофлоры (аэробных  гнилостных микроорганизмов) определяют глубинным посевом на пептонном агаре (среда 3). Подсчет колоний ведется на 5-7 день при 28⁰.

    5. Колиство спор  аэробных гнилостных  бацилл на специальной среде (мясопептонный агар + сусло-агар) – среда 8. Посев поверхностный (0,05мл), подсчет колоний ведут на 4 день (при 28⁰).

    6.Количество  микроскопических грибов и дрожжей определяют на сусло-агаре со стрептомицином (среда 4) поверхностным посевом (0,1 мл). Подсчет колоний ведут на 3-4 день (при необходимости повторно на 7-8 день) при 28⁰.

    7. Титр маслянокислых бактерий устанавливают на жидкой картофельной среде (среда 5). Для определения количества спор маслянокислых бактерий проводят посев из суспензии после пастеризации в течение 10 минут при 75⁰.

    Учет  результатов анализа ведут по интенсивности и выделения газа (кусочки картофеля всплывают на поверхность жидкости), титр маслянокислых бактерий и их спор устанавливают по методу предельных разведений.

    8. Анаэробные протеолитические  бактерии определяют на мясо-пептонном бульоне (среда 6) по выделению газа в поплавках. Посевы выдерживаются при 28⁰ в течение двух недель.

    9. Денитрифицирующие  бактерии учитывают на среде Гильтая (среда 7) при анализе корма из трав, выращенных по фону высоких доз азотных удобрений. Подсчет ведется по интенсивности выделения газа и посевы выдерживают в течение 10-12 дней при 28⁰.

    10. Тест микробиологического роста.

    Для определения фунгистатических (фунгицидных), бактериостатических (бактерицидных) свойств соединений две пробирки (в трех повторностях) с элективной средой, в одной из которых добавлен изучаемый препарат, засевается тест-культурой. Из пробирки с культурой, где после добавления того или иного ингибирующего препарата не наблюдалось роста, переносится петля на свежую среду (не содержащую препарата). Если через 24 часа начинается усиленный рост, изучаемый препарат обладает фунгистатическим, бактериостатическим (тормозящим) действием. Если через неделю роста не наблюдается делается вывод о фунгицидном, бактерицидном (ингибирующим) действии изучаемого вещества (приложение 2).

    В качестве тест-культуры используют наиболее часто встречающиеся представители нежелательной микрофлоры (гнилостные и маслянокислые бактерии, дрожжи, плесневые грибы).

Приложение 1

Состав  элективных сред

Среда 1 Капустный агар с мелом 

                      Капустный бульон  900 мл

     Дрожжевой экстракт  100 мл

     Пептон    10 мл

     Глюкоза   20 г

     Ацетат  натрия   3,35 г

     Марганец  сернокислый  0,025 г

     Агар    15-20 г

    Стерильный  мел добавляют в колбы из расчета 1 г на 200 мл среды. Стерилизуют 30 минут при 0,5 атм.

Среда 2 Капустный агар со спиртом и мелом

    В расплавленную и охлажденную  до 50⁰ среду прибавляют 20 мл этилового спирта (96%) на 200 мл среды, тщательно взбалтывают и заливают в чашки Петри с посевным материалом.

Среда 3 Пептонный агар   

                      Пептон    5 г

                      К₂НРО₄    1 г

                      К₃РО₄    0,5 г

                      MgSO₄    0,5 г

                      NaCl    следы

                                          Водопроводная вода  1 л

     Агар, хорошо промытый 15-20 г

    Стерилизация  при 1 атм. 20 минут.

Среда 4 Сусло-агар со стрептомицином

                      Сусло, разбавленное до

     3% по Баллингу   1 л

     Агар    15-20 г

    Стерилизовать 30 минут при 0,5 атм.

    Перед разливкой среды в чашки Петри, в сусло-агар добавляют 80-100 ед. стрептомицина  на каждый мл среды.

Среда 5. Картофельная среда  с мелом

    В пробирки вносят стерильный мел (на кончике  скальпеля и картофельные кубики величиной 2-3 мм (8-10 шт.), заливают водопроводной водой до ¾ объема пробирок. Стерилизуют 30 минут при 1 атм.

Среда 6 . Мясопептонный бульон

                      Пептон    10 г

                      NaCl    5 г

                      Мясной бульон   1 г

    Заливают  в пробирки с поплавками до ¾ объема. Стерилизуют 20 минут при 1 атм.

Среда 7. Среда Гильтая (видоизмененная)

                      Лимоннокислый натрий 2 г

                      KNO₃    1 г

                      КН₂РО₄    1 г

                      К₂НРО₄    1 г

                      MgSO₄    2 г

                      CaCl₂    0,2 г

                      FeCl₃    следы

                      Дистиллированная вода  1 л

                      1% раствор бром тимолблам  (рН 6,8-7,0)

    Стерилизуют при 1 атм. 20 минут.

Среда 8. Мясопептонный агар и сусло-агар 1:1

    Стерилизовать при 0,5 атм. 30 минут.

Приложение 2

    Действие  консервирующих веществ на дрожжи.

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

     Список  литературы: 

     

1.  «Микробиология» учебник для вузов Н.Р. Ассонов.
2. http://zooengineer.ru/mikrobiologiya_sena_senaja_drojjevanie_kormov
3. www.ppproduct.ru
4. Шмидт В., Веттерау Г. Производство силоса. – М.: Колос, 1975. – 346 с.
5. Федулина Н. Н. Чистякова Л. П. Физиолого-биохимические свойства молочнокислых бактерий сенажа // С.-х. биология.- 1975. – Т.Х , №3 – С. 429-433.
6. Чуканов Н. К., Попенко А. К. Микробиология консервирования трудносилосуемых растений .-Алма-Ата: Наука, 1986. – 191 с.
7. Отчет по научно-исследовательской практике. На тему: «Технология и линии производства мясокостной муки». Мельникова. С. Пенза 2010 г.
8. http://www.agrikulture.ru
9. http://bse.sci-lib.com
10. «Ветеринарная микробиология и иммунология» Н.А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев, Н.И. Смирнова. Под ред. Н.А. Радчука.- М.: Агропромиздат, 1991.-383с.