Достижения генной инженерии

старение организма и  реконструировать их.

 

НЕДОСТАТКИ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ

 

В настоящее время генная инженерия технически несовершенна, так как она не в

состоянии управлять процессом встраивания нового гена. Поэтому невозможно

предвидеть место встраивания  и эффекты добавленного гена. Даже в том случае,

если местоположение гена окажется возможным установить после  его встраивания

в геном, имеющиеся сведения о ДНК очень неполны для  того, чтобы предсказать

результаты.

В середине 1998 года английский ученый Арпад Пустаи на основании  проведенных

опытов впервые заявил о том, что употребление подопытными  крысами генетически

модифицированного картофеля  привело к серьезным повреждениям их внутренних

органов и иммунной системы. У животных возник целый набор  серьезных изменений

желудочно-кишечного тракта, печени, зоба, селезенки. Но самое зловещее -

уменьшился объем мозга.

Это заявление вызвало  противоречивую реакцию научной  общественности. С одной

стороны, институт, в котором  работал Пустаи, заявил, что результаты его

исследований являются необъективными.

Однако независимая комиссия, созданная из 20 ученых из разных стран,

признала, что выводы Пустаи правильны, а безвредность генетически

модифицированных продуктов  действительно подлежит существенной переоценке.

Дополнительным подтверждением того, что воздействие генетически  измененных

продуктов на организм человека и окружающую среду является мало изучено,

стало заявление года ученого  Джона Лузи.

Так, в мае 1999 года он сообщил  о том, что пыльца генетически

модифицированной пшеницы, изначально содержащая небольшую долю пестицидов,

способна убивать личинок бабочки-данаиды.

В то же время некоторые  ученые опять высказали мнение о  том, что лабораторные

исследования не могут  смоделировать условия живой  природы, поэтому на них

нельзя полностью полагаться.

В ноябре 1999 года для обсуждения результатов исследований Пустаи и  Лузи была

организована специальная  научная конференция, однако ее участникам не удалось

выработать общего подхода  к этому вопросу.

При этом само существование  подобных противоречий свидетельствует, что

выведение генетически модифицированных видов растений и животных представляет

определенную опасность, обусловленную непредсказуемостью их развития и

поведения в естественной среде.

Риски, связанные с применением  генной инженерии к продуктам  питания, можно

разделить на три категории: экологические, медицинские и социально-экономические.

 

ДОСТИЖЕНИЯ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ

Группа Кораны синтезировала  ген аланиновой тРНК дрожжей, структура  которого к тому времени была полностью  расшифрована. Этот ген длиной 77 п. н. не содержал регуляторных последовательностей  и поэтому не обладал функциональной активностью. Позднее та же группа авторов  синтезировала первый функционально  активный ген — ген супрессорной тирозиновой тРНК Е. coli длиной около 200 п. н.

 

 Генная инженерия открыла  путь для производства продуктов  белковой природы путем введения  в клетки микроорганизмов искусственно синтезированных кодирующих их генов, где они могут экспрессироваться в составе гибридных молекул. Первой удачной попыткой такого рода стала работа К. Итакуры и Г. Бойера с соавторами (1977) по экспрессии в Е. coil химически синтезированного гена, кодирующего гормон млекопитающих — соматостатин. Ген соматостатина был получен на основе сведений о первичном строении этого пептидного гормона, состоящего всего из 14 аминокислот. Использованный в этой работе подход оказался весьма перспективным для получения и многих других пептидных гормонов.

 

 В различных лабораториях в СССР и за рубежом были созданы штаммы Е. coli, синтезирующие в составе гибридных белков гормон роста человека (соматотропин), пептидные гормоны — брадикинин и ангиотензин, нейропептид лей-энкефалин и др.

 

 Ген гормона роста  человека длиной 584 п. н.— наиболее  длинный из искусственно синтезированных в настоящее время. Он был встроен в плазмиду, реплицирующуюся в Е. coli под контролем промотора триптофанового оперона. Трансформированные полученной химерной плазмидой клетки Е. coli продуцировали при индукции промотора около 3 млн. молекул гормона роста человека в расчете на клетку. Этот полипептид, как было установлено в экспериментах на крысах с удаленным гипофизом, по функциям оказался полностью идентичен гормону роста человека.

 

 В 1976 г. Гилберт и  Максам в Гарвардском университете, а также Сэнгер разработали  быстрый метод химического анализа  ДНК; появилась реальная возможность  определять последовательность  до 1000 нуклеотидов в неделю силами  одного исследователя. В 1982—1985гг. стало возможно создать прибор  для автоматического анализа  нуклеиновых кислот (а значит, генов). Анализ ДНК позволяет дедуцировать, основываясь на генетическом  коде, аминокислотные последовательности  белков, синтез которых находится  под контролем соответствующих  генов. С помощью созданного  в результате совершенствования  анализа белков микроанализатора  Худа— Ханкепиллера (Калифорнийский технологический институт, 1980) за день удается определять последовательность из 100—200 аминокислот, причем для этого требуется всего 10 нг белка (1 нг=10 -9 г)2.

 

 Еще один важнейший  этап—это синтез биополимеров  по установленной структуре. Первые  коммерческие приборы, производящие  автоматизированный синтез полипептидов, были разработаны на основе  исследований Меррифилда в 1963 г. Они используются в исследовательских лабораториях и в фармацевтической промышленности.

 

 Метод химического  синтеза генов обеспечил также  возможность получения штаммов бактерий продуцентов инсулина человека, важного лечебного препарата для больных диабетом. «Ген инсулина синтезировали в вида более 40 в основном шестичленных олигонуклеотидов, которые затем объединяли в единую структуру с помощью ДНК-лигаэы. Полученные двух цепочечные полинуклеотиды длиной 271 и 286 пар оснований были встроены в плазмидные векторы. Туда же были встроены и регуляторные участки ДНК, обеспечивающие экспрессию гибридных молекул. Клонированные гены кодировали синтез проинсулина, который путем несложной химической обработки можно превратить в активный инсулин, включающий две полипептидные цепи А и В из 21 и 30 аминокислотных остатков, соединенных между собой сульфгидрильными связями».

 Таким способом получены  и клонированы гены, кодирующие  глобины человека, животных и  птиц, белок хрусталика глаза  быка, яичный белок, фиброин шелка,  продуцируемый тутовым шелкопрядом,  и др. Этот же принцип был  применен для получения, клонирования  и экспрессии генов интерферона  человека в бактериях. Интерферон  — ценный лекарственный препарат, широко используемый для борьбы  с вирусными инфекциями и лечения  ряда других заболеваний, включая  злокачественные опухоли. Интерферон  вырабатывается в клетках животных  и человека, но обладает выраженной видоспецифичностью. Ю. А. Овчинников и В. Г. Дебабов с сотрудниками получили микроорганизмы, эффективно синтезирующие интерфероны человека. Этим исследователям удалось сконструировать рекомбинантные плазмиды, обуславливающие синтез интерферона человека в Е. coli (рис. 16.2). Очищенный из клеток бактерий интерферон по своим физико-химическим и биологическим свойствам оказался близок интерферону, находящемуся в крови доноров. За счет введения в векторную плазмиду сигнальных последовательностей, инициирующих синтез иРНК и белка, удалось получить бактерии, способные синтезировать до 5 мг интерферона а расчете на 1 л суспензии бактерий. Это в 5000 раз больше, чем содержится в 1 л крови доноров. Замена Е. coli на микробы некоторых других видов позволяет еще больше увеличить производительность такой «фабрики интерферона».

 В 1980 г. Итакура создал  первый синтезатор генов. Вскоре  после этого компания «Био-Лоджикалс» (Торонто) выпустила прибор, сконструированный  Огилви в Университете МакГилла  в Монреале; прибор был способен  в течение 6 ч синтезировать  12-членный олигонуклеотид с заданной  последовательностью. В 1981 г. Худ,  изобретатель белкового микроанализатора, создал другой автомат, выпускаемый  фирмой «Генетик инстраментс».

 Компания «Био-Лоджикалс»  намеревалась до конца 1982 г.  выпустить две модели синтезаторов  олигонуклеотидов—одну полуавтоматическую, а вторую в комплексе с компьютером.  В 1982 г. цена этих приборов  на американском рынке составляла 36000—39500 долл.

 

 

 

 К открытиям связанным  с достижениями генной инженерии  нужно прибавить то, что огромный  генетический «чертеж» многоклеточного  существа просчитан полностью.  Я думаю это можно назвать  достижением века.

 После восьми лет  работы многих исследовательских  групп удалось точно определить 97 миллионов пар нуклеотидов и  их местонахождение в спирали  ДНК, хранящей полную наследственную  информацию микроскопического червячка  Сaenorhabditis elegans длиной около миллиметра Хотя это очень маленький червь, скорее червячок, с него без всякого преувеличения начинается новая эра в биологии. Геном этой нематоды состоит из 97 миллионов пар нуклеотидов ДНК, округленно 0,1 миллиарда пар. Геном человека, согласно большинству оценок, - 3 миллиарда нуклеотидных пар. Разница в 30 раз. Однако именно эта работа, о которой идет речь, окончательно убедила даже самых закоренелых скептиков, что расшифровка строения всего генома человека не только возможна, но и достижима в ближайшие годы.

 В лабораториях мира  полным ходом идет расшифровка  генома человека. Эта международная  программа была начата в 1989 году, тогда же благодаря инициативе  и энергии выдающегося биолога,  ныне покойного академика А.  А. Баева, к программе подключилась  и Россия. В феврале этого года  в Черноголовке под Москвой  прошла конференция "Геном  человека-99", посвященная десятилетию  начала этих работ и памяти  их инициатора, руководившего российской частью программы первые пять лет. Сейчас в разных странах мира, в лабораториях, разделивших между собой "фронт работ" (всего надо прочитать около трех миллиардов пар нуклеотидов), ежедневно расшифровывается более миллиона нуклеотидных пар, причем темп работ все ускоряется.

 Расшифровка, или, как  говорят биологи, секвенирование, генома C. elegans была осуществлена  по совместному проекту двумя  исследовательскими группами: из  Центра геномного секвенирования  Вашингтонского университета (США)  и Сенгеровского центра (Кембридж, Англия). В журнале "Science" от 11 декабря 1998 года опубликована  серия статей, подробно рассказывающая  об этой поистине грандиозной  работе.

 Естественно, расшифровать  геном таких гигантских размеров, как у названной нематоды (напомню: 97 миллионов пар нуклеотидов ДНК), невозможно без огромной подготовительной  работы. Ее в основном завершили  к 1989 году. Прежде всего была построена физическая карта всего генома нематоды. Физическая карта представляет собой небольшие участки ДНК известной структуры (маркеры), расположенные на определенных расстояниях один от другого.

 И вот с 1990 года  началось само секвенирование. Его  темп составлял в 1992 году 1 миллион  пар нуклеотидов в год. Если  бы такой темп сохранился, на  расшифровку всего генома понадобилось  бы почти 100 лет! Ускорить работы  удалось простейшим способом - число  исследователей в каждом центре  возросло примерно до 100. По мере  того, как раскрывалась нуклеотидная  последовательность ДНК

C. elegans, пришлось расстаться  с двумя заблуждениями. Во-первых, оказалось, что генов у нее  не 15 тысяч, как предполагали вначале,  а 19099. Во-вторых, надежда на то, что гены сосредоточены в середине  хромосом, а к концам сильно  редеют, оправдалась лишь отчасти,  гены распределены вдоль хромосом  относительно равномерно, хотя в  центральной части их все-таки  больше.

 Если у дрожжей функция  половины генов в геноме неизвестна (так называемые молчащие гены), то у червя эта доля еще  больше: из 19 тысяч генов 12 тысяч  остаются пока загадочными.

 Значение секвенирования  генома нематоды, конечно, выходит  далеко за рамки того, что можно  назвать полигоном для расшифровки  генома человека. C. elegans - первый многоклеточный  организм, геном которого раскрыт  практически полностью. Можно  напомнить: два года назад был  расшифрован первый геном эукариотического  организма - дрожжей, то есть  организма, клетки которого содержат  оформленные ядра. (К эукариотам относятся все высшие животные и растения, а также одноклеточные и многоклеточные водоросли, грибы и простейшие. Дрожжи, согласно биологической систематике, относятся к одноклеточным грибам.) Иначе говоря, за два года был пройден путь от генома одноклеточного до генома многоклеточного организма.

 

 Программа "Геном  человека", как уже говорилось, - программа общечеловеческая. Каждая  лаборатория, в какой бы стране  она ни находилась, вносит в  нее посильный вклад. И как  только кому-то удается раскрыть  структуру нового гена, эта информация  немедленно поступает в Международный  банк данных, доступный каждому  исследователю. В России по  этой программе работают около  100 исследовательских групп.

 

ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ, МЕДИЦИНСКИЕ  И СОЦИАЛЬНО-ЭКОНОМИЧЕСКИЕ РИСКИ

 

 

Экологические риски

1. Появление супервредителей.

В сущности, такие уже  появились. На Bt-кукурузе и хлопке уже  живет коробочный

(хлопковый) червь, которому  наиболее ценный природный пестицид Bacillus

thuringensis (Bt) не приносит  вреда. Наивно думать, что вредители  на

ухищрения ученых не ответят  своим контрударом. Как известно, в экстремальных