Вода как среда обитания

болезнетворных бактерий.

В водоемах с высоким содержанием  кислорода развиваются аэробные

микроорганизмы, активно  окисляющие и минерализующие органическое ве-

щество, вследствие чего патогенные бактерии лишаются источника питания

и фактически не размножаются, а лишь сохраняют жизнеспособность.

Несмотря на факторы, ограничивающие развитие болезнетворных мик-

роорганизмов, вода часто является источником ряда кишечных инфекцион-

ных заболеваний – брюшного тифа, паратифа, дизентерии, холеры. Через во-

ду передаются и такие заболевания, как инфекционная желтуха, туляремия,

бруцеллез, водная лихорадка, полиомиелит, лептоспироз, шигеллез, туберку-

лез и др. Продолжительность  сохранения патогенных бактерий в речной воде

колеблется в зависимости  от ее состава и свойств. Холерный вибрион может 

сохраняться в ней более  года. Однако, если в воде присутствует бактериофаг,

то холерный вибрион быстро гибнет.

По степени микробного загрязнения различают три категории  воды (или зоны водоема):

1. Полисапробная зона — наиболее сильно загрязненная вода, бедная кислородом, богатая органическими веществами. В 1 мл воды содержание микроорганизмов достигает 1 млн. и более, преобладают E.coli и анаэробные бактерии, вызывающие процессы гниения и брожения.

2. Мезосапробная зона — вода, загрязненная умеренно, в ней активно происходит минерализация органических веществ с интенсивными процессами окисления и нитрификации. Содержание микроорганизмов в 1 мл воды — сотни тысяч бактерий, количество E.coli значительно меньше.

3. Олигосапробная зона — зона чистой воды, количество микроорганизмов в 1 мл воды — десятки или сотни, не более; E.coli отсутствует или встречается в количестве нескольких клеток на 1 л воды.

 

 Методы санитарного  исследования водоисточника включают:

• Санитарно-топографическое обследование и определение количества воды в водоисточнике (его дебит).
• Санитарно-эпидемиологическое обследование.
• Санитарно-техническое обследование.
• Взятие проб воды для анализа.

 

5. Правила отбора  воды для исследования.

Правильный  забор воды для лабораторного анализа является обязательным условием для получения достоверных результатов. При отборе проб необходимо соблюдать следующие условия: пробы воды из открытых водоёмов, а также из колодцев берут в том месте и на той глубине, где намечается или уже осуществляется забор воды, место и время должны исключать элемент случайности; от момента взятия проб до начала анализа должно пройти минимальное время, чтобы вода не претерпела заметных изменений.

Для физического (органолептического) и  химического анализа берут воду в количестве 2-5 л в чистые бутылки, промытые дистиллированной водой и дополнительно той водой, которую берут для анализа. Для бактериологического анализа пробы воды берут в стерильную посуду в количестве 400-500 мл: все работы по взятию проб для бактериологического анализа производят в стерильных условиях.

При отборе проб составляется сопроводительный документ с обозначением названия водоисточника, из которого взята проба, места расположения, температуры воды и состояния погоды в момент забора, дата и час взятия пробы.

 

6. Показатели, характеризующие  эпидемиологическую безопасность  воды.

К показателям, характеризующим эпидемиологическую безопасность воды, относят следующие  две подгруппы показателей:

• Санитарно-микробиологические.
• Санитарно-химические.

Санитарно-химические  показатели включают показатели, характеризующие наличие органических веществ или продуктов их распада: окисляемость, растворённый кислород, группу азота (азот аммонийный, нитраты, нитриты), хлориды, сульфаты.

Аммиак является начальным продуктом разложения органических азотосодержащих (в том числе белковых) веществ. Поэтому наличие аммиака в воде (в количествах, превышающих 0,1 мг/л) во многих случаях может расцениваться как показатель опасного в эпидемиологическом отношении свежего загрязнения воды органическими веществами животного происхождения. Однако, особенно в глубоких подземных водах, возможно присутствие аммиака, образовавшегося за счёт восстановления нитратов при отсутствии кислорода. В этом случае наличие аммиака не указывает на недоброкачественность воды. Не является показателем органического загрязнения повышенное содержание аммиака в болотистых и торфяных водах (аммиак растительного происхождения).

Соли  азотистой кислоты (нитриты) представляют собой продукты окисления аммиака под влиянием микроорганизмов в процессе нитрификации. Наличие нитритов в количествах, превышающих 0,002 мг/л, свидетельствуют о возможности загрязнения воды органическими веществами. Нитриты указывают на известную давность загрязнения воды.

Соли  азотной кислоты (нитраты)- конечные продукты минерализации органических азотосодержащих веществ. Допустимое содержание нитритов в питьевой воде не более 45 мг/л. Одновременное содержание в воде аммиака, нитритов, нитратов свидетельствует о незавершенности этого процесса и опасном в эпидемиологическом отношении загрязнении воды. Повышенное содержание нитратов в воде может быть также минерального происхождения за счёт растворения почвенных солей, например, селитры.

Экскременты человека и животных, особенно моча, а также кухонные помои содержат много хлористого натрия. Совместное присутствие хлоридов и аммиака говорит о загрязнении воды мочой.

При повышении обычного для  данной местности содержания солей серной кислоты могут служить признаком загрязнения воды животными отбросами. Сера является составной частью белковых тел, которые при разложении и последующем окислении дают соли серной кислоты.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Санитарно-микробактериологическое исследование воды

Исследованию подлежит вода централизованного водоснабжения, колодцев, открытых водоемов, бассейнов, сточные воды.

Отбор проб водопроводной  воды .

Кран стерилизуют обжиганием с последующим стоком воды в течение 10 мин при полностью открытом кране. Пробу воды забирают в стерильную стеклянную посуду с плотно закрывающимися пробками. Доставка воды производится в контейнерах-холодильниках при температуре 4-10 ° С. 
Для оценки санитарно-бактериологического состояния воды используют следующие показатели:

• определение общего микробного числа (ОМЧ);
• определение бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий;
• определение спор сульфитредуцирующих клостридий;
• определение колифагов;
• определение патогенных бактерий кишечной группы.

Исследование питьевой воды на наличие колифагов, патогенных бактерий кишечной группы проводится по эпидемиологическим показателям. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий проводится при оценке эффективности технологий обработки воды.

Определение общего микробного числа (ОМЧ)

Для определения ОМЧ вносят два объема воды по 1 мл в стерильные чашки Петри, в которые выливают по 6-8 мл расплавленного и остуженного  до 45 ° С МПА. Содержимое чашки смешивают, оставляют до застывания агара и помещают в термостат на 24 ч. Подсчитывают количество колоний на чашках, вычисляют среднее арифметическое. Результат выражают числом КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл воды.

Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae

Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками бактерий семейства Enterobacteriaceae , но они способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 ч. 
Для выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий используют два метода: метод мембранных фильтров и титрационный метод. 
Метод мембранных фильтров . Необходимый объем воды - 300 мл -фильтруют через мембранные фильтры по 100 мл. Фильтры переносят на среду Эндо в чашке Петри и инкубируют при 37 ° С 24 ч. Подсчитывают число красных и красных с металлическим блеском колоний. 
Идентификацию бактерий проводят по оксидазному тесту и тесту образования кислоты и газа при ферментации лактозы (маннита) для чего исследуют не менее 10 колоний. 
Так как, микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae и термотолерантные колиформные бактерии не обладают оксидазной активностью, то оксидазоположительные культуры дальше не исследуются.  
Все лактозоположительные колонии засевают в две пробирки с одной из лактозных сред и 1 пробирку инкубируют при 37 ° (для культивирования микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae ), а другую при 44 ° (для культивирования термотолерантных колиформных бактерий). 
Учитывают бактерии семейства Enterobacteriaceae - показатели давнего фекального загрязнения воды и термотолерантные колиформные бактерии - показатели свежего фекального загрязнения.  
Результаты анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий в 100 мл воды. 
Титрационный метод . Принцип метода заключается в посеве установленного объема воды (300 мл - 3 объема по 100 мл - качественный анализ и 333 мл - 3 объема по 100 мл, 3 объема по 10 мл, 3 объема по 1 мл - количественный анализ) в лактозно-пептонную (или глюкозо-пептонную) среду, с последующим пересевом в среду Эндо и идентификацией культуры по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам для определения бактерий семейства Enterobacteriaceae . 
Для выявления термотолерантных колиформных бактерий делают посев 2-3 изолированных колоний в пробирки с лактозной средой, нагретой на водяной бане или в термостате до 44 ° С. 
При обнаружении бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий хотя бы в одном из трех объемов делают заключение - об обнаружении колиформных бактерий в 100 мл воды.

Определение спор сульфитредуцирующих бактерий

Сульфитредуцирующие клостридии, преимущественно C . perfringens - спорообразующие анаэробные палочки, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44 ° в течение 24 ч. 
Определение сульфитредуцирующих клостридий проводят двумя методами: метод мембранных фильтров и прямым посевом. 
Метод мембранных фильтров . Метод основан на фильтровании воды через мембранные фильтры, выращивании посевов в железо-сульфитном агаре в анаэробных условиях и подсчете черных колоний. 
Результаты анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.  
Метод прямого посева . Производят посев 20 мл воды в пробирки с железо-сульфитным агаром (2 объема по 10 мл в 2 пробирки или 4 объема по 5 мл в 4 пробирки) инкубируют при 44 ° С 24 ч и посчитывают черные колонии. 
Результаты выражают числом КОЕ в 20 мл воды.

Определение колифагов

Колифаги - вирусы, лизирующие кишечную палочку и образующие зоны лизиса (бляшки) на бактериальном газоне.Определение колифагов проводят прямым и титрационным методами. 
Прямой метод . Исследуемую воду вносят в 5 стерильных чашек по 20 мл. В 6-ю - контрольную воду не берут. Затем во все чашки заливают расплавленный и остуженный до 45 ° агар с добавлением суточной культуры E .сoli , штамм К 2 (1,5 мл смыва E .сoli в концентрации 10 ⁹ на 150 мл агара). Перемешивают, оставляют для застывания и инкубируют при 37 ° С 24 ч. 
Учитывают результат подсчетом бляшек в чашках Петри в БОЕ (бляшкообразующих единицах) в 100 мл воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать. 
Титрационный метод . В основе метода - предварительное подращивание колифагов в среде обогащения в присутствии E .сoli и последующее выявления бляшек колифага на газоне E .сoli .

Определение бактерий родов сальмонелла и шигелла

Для выявления патогенных энтеробактерий исследуемый объем воды (не менее 2-3 мл) засевают в среды обогащения (Мюллера-Кауфмана, магниевая среда) с последующим высевом на плотные селективные и дифференциально-диагностические среды - Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар. Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и серологическим свойствам.

Оценка воды по микробиологическим показателям

Критерии оценки воды разработаны  дифференциально в зависимости от ее категории и назначения. Вода плавательных бассейнов по своим качествам должна соответствовать ГОСТу питьевой воды (табл. 2).

Таблица 2

Нормативы качества питьевой воды

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
1. Общее микробное число	КОЕ в 1 мл воды	Не более 50
2. Бактерии семейства  Enterobacteriaceae	Число кишечных бактерий в 300 мл воды	Отсутствие
3. Термотолерантные колиформные бактерии	Число кишечных бактерий в 300 мл воды	Отсутствие
4. Споры сульфитредуцирующих клостридий	Число спор в 20 мл воды	Отсутствие
5. Колифаги	Число БОЕ в 100 мл воды	Отсутствие

 

 

Примечание. КОЕ - колониеобразующая  единица;БОЕ - бляшкообразующая единица