Ферменты в диагностике

Ферменты  — сложные органические вещества, которые  образуются в живой  клетке и играют важную роль катализатора всех процессов, происходящих в организме. Большинство  из них состоит  из двух компонентов: белкового (апофермент) и небелкового (кофермент). В активную часть  входят: железо, марганец, кальций, медь, цинк, а также некоторые  витамины. Кофермент  становится активным тогда, когда соединяется  с апоферментом. 
Будучи белковыми веществами, ферменты при нагревании до 54С необратимо коагулируют (сворачиваются) и теряют свои каталитические действия. Также они легко разрушаются под действием кислорода и света. Все процессы обмена веществ: белковый, углеводный, жировой, витаминный, минеральный — протекают при содействии ферментов. При нормальном атмосферном давлении и температуре 37С в живом организме эти процессы протекают быстро, сберегая большое количество энергии. 
 
Установлено, что существует связь между ферментами, гормонами и витаминами. Известно, что авитаминозы и болезни, вызванные неправильной внутренней секрецией, объясняются нарушением обменных процессов организма. 
 
С сырой пищей 60—80% ферментов достигают тонких кишок без изменений.  
Витамин Е, которым насыщена свежая растительная пища, играет роль защитного фактора ферментов.

 
Функции ферментов 
 
Ферменты — белки, являющиеся биологическими катализаторами. Ферменты присутствуют во всех живых клетках и способствуют превращению одних веществ (субстратов) в другие (продукты). Ферменты выступают в роли катализаторов практически во всех биохимических реакциях, протекающих в живых организмах — ими катализируется около 4000 биореакций[2]. Ферменты играют важнейшую роль во всех процессах жизнедеятельности, направляя и регулируя обмен веществ организма. 
 
Подобно всем катализаторам, ферменты ускоряют как прямую, так и обратную реакцию, понижая энергию активации процесса. Химическое равновесие при этом не смещается ни в прямую, ни в обратную сторону. Отличительной особенностью ферментов по сравнению с небелковыми катализаторами является их высокая специфичность — константа связывания некоторых субстратов с белком может достигать 10−10 моль/л и менее. 
 
Ферменты широко используются в народном хозяйстве — пищевой, текстильной промышленности, в фармакологии. 
 
Классификация ферментов 
 
КФ 1: Оксидоредуктазы, катализирующие окисление или восстановление. Пример: каталаза, алкогольдегидрогеназа  

КФ 2: Трансферазы, катализирующие перенос химических групп с одной молекулы субстрата на другую. Среди трансфераз особо выделяют киназы, переносящие фосфатную группу, как правило, с молекулы АТФ.  

КФ 3: Гидролазы, катализирующие гидролиз химических связей. Пример: эстеразы, пепсин, трипсин, амилаза, липопротеинлипаза  

КФ 4: Лиазы, катализирующие разрыв химических связей без гидролиза с образованием двойной связи в одном из продуктов.  

КФ 5: Изомеразы, катализирующие структурные или геометрические изменения в молекуле субстрата.  

КФ 6: Лигазы, катализирующие образование химических связей между субстратами за счет гидролиза АТФ. Пример: ДНК-полимераза. 
 

Применение  ферментов в медицине 
 

Успехи современной  биохимии в выяснении  фундаментальной  природы жизни  и молекулярных основ  патологии, включая  наследственные болезни  человека, а также  в определении  структуры и функции  белков и нуклеиновых  кислот в значительной степени обусловлены  широким внедрением в биохимию достижений физики, химии и  математики. Этот союз с точными науками  позволил не только разработать методологические подходы для более  глубокого изучения строения и функций  индивидуальных химических компонентов живой  материи на молекулярном уровне, но и способствовал  развитию новых направлений  в биохимии, включая  молекулярную биологию, биоорганическую  химию и энзимологию.

Учение о ферментах - энзимология - превратилось в самостоятельно и интенсивно развивающуюся область  знания. Российские ученые (академики  В.А. Энгельгардт, А.Е. Браунштейн, С.Р. Мардашев, И.В. Березин и др.) внесли крупный  вклад в мировую науку в  области изучения структуры и  функций ферментов, механизмов энзиматического  катализа и регуляции активности и синтеза ферментов; это способствовало существенному улучшению методов  диагностики, лечения и профилактики заболеваний человека.

Прежде чем  касаться медицинских проблем энзимологии, кратко перечислим основные функции  ферментов не только в организме  человека и животных, но и в отдельной  живой клетке. Основной и, может быть, главной функцией ферментов является их способность резко повышать (в  десятки и сотни миллиардов раз) скорость химических реакций, то есть ферменты выполняют роль катализаторов  огромного числа химических реакций, осуществляемых ежесекундно во всех живых системах. Более того, ферменты являются регуляторами скорости химических реакций, строго контролируя процессы синтеза и распада индивидуальных химических компонентов клетки и  всего организма в целом. Благодаря  этому свойству ферментов живые  системы сохраняют постоянство  внутренней среды (так называемый гомеостаз); они отличаются от современных крупных промышленных производств не мощностью или даже не грузоподъемностью, а высокой эффективностью, экономичностью, рациональностью и ювелирной точностью результатов в микропространстве клетки (никаких побочных продуктов, никаких отходов, загрязняющих окружающую среду).

Ферменты выполняют  важные защитные функции, обезвреживая как экзогенные (поступающие из внешней  среды), так и эндогенные (образующиеся в самом организме) токсические  вещества; последние подвергаются под  действием ферментов различным  реакциям окисления, восстановления и, наконец, распада на продукты, теряющие свои токсические свойства. Эта область  исследования получила название ксенобиохимии.

Ферменты используются, кроме того, в качестве инструментов для осуществления тонкого химического  органического синтеза в легкой, пищевой, микробиологической и фармацевтической промышленности (производство кормового  белка, гормонов, антибиотиков и других лекарственных препаратов и L-аминокислот), а также в генноинженерных  исследованиях и биотехнологии.

Касаясь медицинских  проблем учения о ферментах, следует  прежде всего подчеркнуть, что одно из перспективных направлений исследования ферментов - медицинская энзимология - явилось логическим развитием общего биологического учения о ферментах. К настоящему времени получены убедительные доказательства, что современная  биология и медицина говорят на языке  энзимологии и что возможности  применения ферментов в медицине теоретически безграничны. В частности, четко определились три основных направления исследований в области  медицинской энзимологии: энзимопатология, энзимодиагностика и энзимотерапия. По этим проблемам созываются национальные и международные конференции, симпозиумы и конгрессы, издаются научные журналы (например, "Вопросы медицинской  химии"), публикуются ежегодные  сборники (Advanses in Clinical Enzymology, Annual Reports in Medical Chemistry) и т.д. Отметим также, что  в каждой из указанных областей медицинской  энзимологии имеются не только собственные  цели и конкретные задачи, но и особые методологические подходы и методические приемы. Ниже будут кратко изложены наши представления о первом направлении  медицинской энзимологии, в частности  энзимопатологии, и более подробно об использовании ферментов для  диагностики органических и функциональных поражений организма и отдельных  органов при патологии.

Область исследования энзимопатологии, хотя и включает название патологии (учение о причинах и механизмах развития болезней), на самом деле является теоретической, фундаментальной частью медицинской энзимологии. Она призвана изучать молекулярные основы развития патологического процесса, основанные на данных нарушения механизмов регуляции активности или синтеза индивидуального фермента, или группы ферментов. Ферменты выполняют не только уникальные каталитические функции, но и, обладая выраженной органотропностью и высокой специфичностью действия, могут быть использованы в качестве самых тонких и избирательных инструментов для направленного воздействия на патологический процесс. Как известно, из более чем двух тысяч наследственных болезней человека молекулярный механизм развития выяснен только у двух - трех десятков. Чаще всего развитие болезни непосредственно связано с наследственной недостаточностью или полным отсутствием синтеза одного-единственного фермента в организме больного.

Типичным примером подобной связи болезни с отсутствием  синтеза в печени специфического фермента является фенилпировиноградная олигофрения - наследственное заболевание, приводящее в раннем детстве к  гибели ребенка или к развитию тяжелой умственной отсталости. Молекулярный дефект болезни заключается в  блокировании превращения незаменимой  аминокислоты фенилаланина (Фен) в тирозин (Тир) в соответствии с уравнением

Оказалось, что  фермент, катализирующий данную реакцию, - Фен-4-гидроксилаза, точнее Фен-4-монооксигеназа, - не синтезируется в клетках печени, единственном органе, где он в норме  открыт. Следствием этого молекулярного  нарушения обмена фенилаланина является развитие тяжелого наследственного  заболевания, обусловленного избыточным накоплением самого фенилаланина и  продуктов его побочного пути обмена - фенилпировиноградной кислоты (отсюда и название болезни) - в организме, в частности в ткани мозга  и сыворотке крови больных  детей. Обычно диагноз ставят на основании  химического метода открытия фенилаланина или фенилпировиноградной кислоты  на пеленках детей. Лечение в основном сводится к исключению из питания  ребенка (в том числе и из молока матери) аминокислоты фенилаланина. Для  такого ребенка тирозин (см. отличия  в формулах) оказывается незаменимой  аминокислотой.

Аналогично, развитие другого тяжелого наследственного  заболевания - галактоземии, то есть непереносимость  молочного сахара, связано с отсутствием  синтеза в клетках печени фермента, катализирующего превращение галактозы  в глюкозу. Следствием подобной аномалии является накопление галактозы в  тканях и развитие катаракты в  раннем детстве, поражения тканей печени и мозга, нередко приводящие к  гибели ребенка; лечение в этом случае сводится к исключению из диеты молочного  сахара.

Помимо наследственных заболеваний, энзимопатология успешно  решает и проблемы патогенеза соматических болезней, не столько причинных факторов, вызывающих развитие болезни, сколько  механизмов развития наиболее распространенных болезней человека. В частности, организованы крупные научные центры и Научно-исследовательские  институты (Онкологический научный  центр РАМН, Кардиологический научный  центр РАМН, НИИ ревматологии РАМН), в задачу которых входит выяснение  молекулярных основ, например, злокачественного роста, артериосклероза или ревматоидных артритов. Нетрудно представить огромную роль ферментных систем или даже отдельных  ферментов, нарушение регуляции  активности или синтеза которых  приводит к развитию, формированию патологического процесса.

Второе направление  научных исследований в области  медицинской энзимологии - энзимодиагностика - призвано заниматься разработкой  ферментных тестов, основанных на определении  активности (уровня) ферментов и  изоферментов в биологических жидкостях  организма больного (сыворотка крови, желудочный или дуоденальный сок, спинномозговая жидкость, моча и др.). Эти исследования развиваются в двух направлениях: во-первых, по пути поиска органотропных  или тканетропных ферментов, специфичных  для определенного органа, группы органов или целостного организма  человека; во-вторых, по пути совершенствования  уже описанных в литературе методов  определения активности ферментов  в биосредах.

Диагностическая энзимология достигла огромных успехов, помогая врачу не только в постановке правильного диагноза заболевания  и выяснения степени тяжести  болезни, но и в определении правильности избранного метода лечения. В настоящее  время разработаны количественные методы анализа многих распространенных ферментов, выявляемых в биологических  жидкостях при поражении разных органов. Для каждого из этих ферментов  определены контрольные величины (уровни) активности и пределы колебания  в норме как в сыворотке  крови, так и в самом органе.

В качестве примера  можно сослаться на результаты определения  активности двух трансаминаз: аспартатаминотрансферазы (в клинической литературе больше известной как глутамат-оксалоацетат-трансаминаза - GOT) и аланинаминотрансферазы (глутамат-пируват-трансаминазы - GPT); величины активности этих ферментов  в сыворотке крови в норме  колеблются между 5 - 40 международными единицами. При сердечной недостаточности, при ишемической болезни сердца активность обеих трансаминаз в  сыворотке крови больного лишь слегка, хотя и статистически достоверно, повышается; однако при наступлении  инфаркта миокарда уже через 20 минут  активность обеих трансаминаз в  сыворотке крови резко, в десятки  и сотни раз, превышает уровни контрольных величин в крови  здорового человека.

Необходимо указать, что, помимо трансаминаз сыворотки  крови, при инфаркте миокарда весьма информативными диагностическими ферментными  пробами являются лактатдегидрогеназный  и креатинфосфокиназный тесты, относящиеся  также к так называемым некротическим  ферментным методам. Это означает, что  при повреждении и распаде  части сердечной мышцы вследствие закупорки коронарной артерии тромбом  из обескровленной зоны вымываются в  кровь продукты распада, включая  ферменты. Укажем также, что при благополучном  исходе болезни уровни ферментов  в сыворотке крови возвращаются к норме уже ко 2 - 3-му дню после  инфаркта. В то же время при повторном  инфаркте миокарда, наступающем обычно в течение первой недели болезни, электрокардиограмма обычно не улавливает повторного инфаркта, тогда как ферментные тесты реагируют повторным и  резким повышением уровня их в сыворотке  крови.