Флюорисцентная микросопия

 

Выполнила Гарифулина Камила 102

группа 

Флуорисцентная микроскопия

    метод наблюдения под микроскопом люминесцентного свечения микрообъектов при освещении их сине-фиолетовым светом или ультрафиолетовыми лучами, она основана на способности некоторых веществ люминесцировать, т. е. светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом.  
 
 

Флуоресцентная  или люминесцентная микроскопия

• Молекулы  способны поглощать кванты света  и переходить в электронно-возбуждённые состояния. Возвращение молекулы в  “обычное” (основное) состояние, сопровождающееся излучением света, называют флуоресценцией. Поглощение и флуоресценция обуславливаются  строением энергетических уровней  электронов молекулы и поэтому является специфическим для каждого типа молекулы свойством .

 
 

Описание:

• Флуоресцентный  микроскоп состоит из:
• 1) источника света, возбуждающего флуорофор;
• 2)детектора, регистрирующего излучение флуорофора;
• 3) оптической системы, которая обеспечивает фокусировку света и увеличение объекта

 

• Флюорофор — фрагмент молекулы, придающий ей флуоресцентные свойства. Аналог хромофора.
• Как правило флуорофором является карбо- или гетероциклическое ядро, которое поглощает энергию определённой длины волны и после этого выделяет энергию другой длины волны.

 
 

Устройство  флуоресцентного микроскопа:

Magnum-B флуоресцентный – бинокулярный биологический лабораторный

Magnum-B флуоресцентный – бинокулярный биологический лабораторный

Поскольку большинство микроорганизмов не обладают собственной люминесценцией, существует несколько способов их обработки для наблюдения в люминесцентном микроскопе. Прежде всего это флюорохромирование - окрашивание сильно разведенными (до нескольких микрограмм/мл) растворами флюоресцирующих красителей (флюорохромов). Этот метод используется для бактериоскопического исследования возбудителей некоторых инфекций: туберкулеза (ауромин),, включений в клетках, образуемых некоторыми вирусами и др. Этот же способ может применяться для цитохимического изучения живых и фиксированных микроорганизмов: некоторые флюорохромы избирательно связываются с полимерами клетки (акридиновый оранжевый связываясь с ДНК флюоресцирует зеленым, а с РНК - красным. 
В реакции иммуннофлюоресценции с помощью антител, меченных флюорохромами (ФИТЦ и др.), выявляются антигены микроорганизмов или антитела в сыворотке больных.

Некоторые бактерии, связанные с круговоротом азота. Снимок флуоресцентным микроскопом  со специальным окрашиванием

Группа  однодневных эмбрионов Glofish  
внутри икринок под флуоресцентным микроскопом

• Интенсивное развитие флуоресцентной микроскопии  на рубеже XX-ого и ХХI-ого веков  привело к развитию новых методов  – двухфотонной и конфокальной микроскопии, а также ряда подходов, позволивших  преодолеть дифракционный барьер оптического  разрешения и достичь беспрецедентного нано-разрешения (флуоресцентная наноскопия).

 
 

Наука не стоит на месте!

Исследование  теломерных участков при помощи флуоресцентного микроскопа Совмещены изображения, полученные на стадии интерфазы (ядро) и метафазы (отдельные хромосомы).

Флуоресцентные  белки - это красиво. Для демонстрации их возможностей ученые смогли нарисовать такую картинку, вырастив светящихся разными цветами бактерий на чашке  Петри.  

Комбинируя  две белковые метки и используя  специальный микроскоп ученые смогли вместо нечеткого снимка ядра раковой  клетки получить (справа) детальное  изображение, способное помочь в  понимании причин болезни.