Достижение генной инженерии

Министерство  образования и науке РФ

Федеральное агентство по образованию

Государственного  образовательного учреждения

Высшего профессионального образования 
 

Кафедра физики, теории и методики обучения физики. 
 

  «Достижения генной инженерии»

Реферат 
 

Выполнил:

Проверил:  
 
 
 
 
 
 
 
 

2011

СОДЕРЖАНИЕ

Введение ........................................................................................3

1. Генная инженерия.......................................……………………4-5

1.1. Методы генной инженерии ....................................................6-10

1.2. Методы введения ДНК в бактериальные клетки..................11-14

1.3. Генетическая рекомбинация in vitro ………………………..15-16

2. Достижения генной инженерии.....................................………17 -21

2.1. Молекулярная геномика………………………………………22-24

2.2. Генная терапия……………………………………………………25

Заключение ..............................................………………………….26

Список литературы ..................................…………………………27 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Введение  

В своей работе я раскрываю тему достижений генной инженерии . Возможности, открываемые  генетической инженерией перед человечеством  как в области фундаментальной  науки, так и  во многих других областях, весьма велики и нередко даже революционны. Так, она позволяет осуществлять индустриальное массовое производство нужных белков, значительно облегчает  технологические процессы для получения  продуктов ферментации — энзимов  и  аминокислот, в будущем может  применяться для улучшения растений и животных, а также для лечения  наследственных болезней человека. Таким  образом, генная инженерия, будучи  одним из магистральных направлений  научно-технического прогресса, активно  способствует ускорению решения  многих задач, таких, как продовольственная, сельскохозяйственная, энергетическая, экологическая.

Но особенно большие возможности генная инженерия  открывает перед медициной и  фармацевтикой, поскольку применение генной инженерии и гибридомных  методов может привести к коренным преобразованиям медицины. Многие болезни, для которых в настоящее время  не существует адекватных методов диагностики  и лечения (раковые, сердечно-сосудистые, вирусные и паразитные инфекции, нервные  и умственные расстройства), с помощью  генной инженерии станут доступны и  диагностике, и лечению.  
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Генная инженерия 

За последние 10—15 лет были созданы принципиально  новые методы манипулирования с  нуклеиновыми кисло­тами in vitro, на основе которых зародился и бурно  развивается новый раздел молекулярной биологии и генетики — генная инженерия. Принципиальное отличие генной инженерии  от использовавшихся ранее традиционных приемов изменения состоит в  том, что она дает возможность  конструировать функционально активные генетические структуры in vitro в форме  рекомбинантных ДНК.

Понятия «генная» и «генетическая» инженерия часто  употребляют как синонимы, хотя последнее  является более широким и включает манипулирование не только с отдельными генами, но и с более крупными частями генома. Работа по переделке  генотипа животных или растений с  помощью скрещиваний ограничены пределами вида либо близких в  видовом отношении форм. Напротив, генная инженерия, как будет показано ниже, стирает межвидовые барьеры, обеспечивая  возможность создания организмов с  новыми, в том числе и не встречающимися в природе, комбинациями наследственных свойств.

Генная инженерия  представляет собой совокупность методов, позволяющих не только получать реконбинантные ДНК из фрагментов геномов разных организмов, но и вводить такие  рекомбинантные молекулы в клетку, создавая условия для экспрессии в ней введенных, часто совершенно  чужеродных генов. Таким образом, в  этом случае исследователь оперирует  непосредственно с генами, причем их перенос может не зависеть от таксономического родства используемых организмов. Эта особенность генной инженерии представляет ее главное  отличие от ранее исполь­зовавшихся  приемов изменения генотипа.

Первенствующую  роль в формировании генной инженерии  сыграла генетика микроорганизмов, идеи и методы, разработанные молекулярной генетикой и химией нуклеиновых  кислот. Формальной датой рождения генной инженерии считают 1972 г., когда  группа П. Берга в США создала  первую рекомбинантиую ДНК in vitro, объединившую в своем составе генетический материал из трех источников: полный геном  онкогенного вируса обезьян SV40, часть  генома умеренного бактериофага К и  гены галактозного оперона Е. coli. Сконструированная  рекомбинантная молекула не была исследована  на функциональную активность, поскольку у авторов этой работы возникли опасения, что методы генной инженерии могут привести к появлению

микроорганизмов, опасных для здоровья человека, например бактерий Е. coil, способных перенести  онкогенные вирусы животных в кишечник человека. Разработанные позднее  правила работы с рекомбинантными  молекулами позволили практически  устранить возможность вредных  последствий создания рекомбинантных ДНК, объединяющих в своем составе  гены разного происхождения. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Методы генной инженерии 

Возможность выделения  отдельных генов в составе  относительно небольших фрагментов ДНК была продемон­стрирована незадолго  до возникновения генной инженерии  в экспериментах in vitro . В 1969 г. Дж. Беквит, Дж. Шапиро и другие опубликовали работу по выделению генов лактозного оперона  Е.coli, основанную на сочетании традиционных методов генетики микроорганизмов  и физических методов выделения  и гибридизации молекул ДНК.

Отдельные гены с целью их последующего молекулярного  клонирования в составе рекомбинантных ДНК методами генной инженерии могут  быть получены следующими способами: 1)непосредственным выделением из природных источников; 2)путем химического синтеза;3) копированием соответствующей гену и РНК для получения комплиментарной ДНК-вой реплики (к ДНК).

Первый метод  широко использовался на раннем этапе  развития генной инженерии. Тотальную  ДНК из разных источников подвергали деградации различными рестриктазами, сшивали с векторными молекулами, вводили в реципиентные клетки и  отбирали клоны с гибридными молекулами, включавшими требуемый ген, по появлению  соответствующих маркеров донора (например, устойчивости к определенному антибиотику) либо с помощью специальных иммунологических и гибридизационных методов. Этот метод  не утратил своего значения и успешно  применяется, например для создания банка генов.

Искусственный синтез гена впервые осуществлен  химическим путем в 1969 г. группой  Кораны с сотрудниками. Химическому  синтезу генов существенно способствовало совершенствование методов изучения первичной структуры белков или  других продуктов, кодируемых синтезируемым  геном, а также методов определения  первичной структуры (секвенирования) нуклеиновых кислот. Секвенирование ДНК играет большую роль не только в работах по химическому синтезу  генов, но и при изучении их функции, их регуляторных последовательностей, а также целых генетических систем, например мобильных диспергированных генов у эукариот.

Анализ первичной  структуры ДНК, т. е. установление последовательности нуклеотидных остатков в ее молекуле, в настоящее время основан  на двух методах — методе химической деградации (А. Максам и В. Гилберт, 1977) и методе полимеразного копирования с использованием терминирующих аналогов нуклеотидов (Ф. Сэнгер, 1977).

В практике генной инженерии широко распространен  и третий метод искусственного получения  генов, основанный на их ферментативном синтезе с помощью механизма  обратной транскрипции. Этот механизм связан с активностью РНК-зависимой  ДНК-полимеразы или обратной транскриптазы  — фермента, впервые обнаруженного  при исследовании репликации  РНК  онкогенных вирусов. Фермент способен строить ДНК-копии на разных РНК, включая синтетические полирибонуклеотиды. С помощью обратной транскриптазы, называемой иногда ревертазой, можно  синтезировать практически любой  индивидуальный ген в присутствии  соответствующих иРНК, методы выделении  которых достаточно разработаны. В 70-е годы появились методы выделения  в чистом виде фрагментов ДНК с  помощью электрофореза. В руки ученых попали "молекулярные ножницы".

Транспортным  средством переноса генетической информации в клетку стал вирус. Явление трансдукции  — переноса генов из одной клетки в другую с помощью вирусов  изучали еще с 50-х годов. Но вирус  не должен был сразу уничтожать всю  клетку, поэтому не все вирусы подходили  для этой роли.

Известно, что  бактериальные клетки могут обмениваться генетическим материалом при помощи плазмид (небольших частиц с фрагментами ДНК). Поэтому введение нужного гена в плазмиду позволяет в дальнейшем перенести этот ген в бактерию (это еще один из механизмов транспорта в генной инженерии). Появилась возможность изучать распределение нуклеотидов в оп­ределенном гене или получать нужный белок. Для этого создается рекомбинантная ДНК, которая возникает, когда ДНК одного организма внедряется в клетки другого. В качестве последнего используются клетки организма, который размножается много быстрее первого, например, бактерии. Так, в 80-е годы были разработаны интерфероны ~ белки, способные подавлять размножение вирусов. Были выбраны наиболее подходящие для переноса гены и мобильные участки ДНК. Например, культурным растениям вводят гены, повышающие их иммунитет и устойчивость.

В 1983г. Барбара  Мак-клинток при изучении генетики кукурузы обнаружила в ее геноме один "подвижный" ген, отвечающий за цвет початка. Независимо от нес подвижные  гены были открыты методами молекулярной генетики советским ученым Г. П. Георгисвым. В 1981 г. процесс выделения генов  и получения из них различных  цепей был автоматизирован.

При всем разнообразии методов основная схема любой  генно-инженерной работы остается неизменной. Она включает:обработку кольцевой  векторной молекулы рестриктазой с  образованием линейной формы ДНК;сплавление ее с фрагментом чужеродной ДНК, ведущее  к формированию гибридной структуры;введение гибрида в клетку реципиента; отбор  клонов трансформированных клеток на селективных средах; доказательство присутствия рекомбинантной ДНК  в этих клонах путем ее выделения  из клеток, обработки соот­ветствующими  рестриктазами и анализа образовавшихся фрагментов методом электрофореза  в агарозном геле.

Известно несколько  методов объединения фрагментов ДНК из разных источников, позволяющих включить клонируемую донорную ДНК в состав вектора. Один из них основан на соединении фрагментов, каждый из которых несет идентичные «хлипкие» концы, полученные под действием одной и той же рестриктазы. При другом методе, ферментативном, используется возможность соединения двухцепочных концов фрагментов ДНК с помощью ДНК-лигазы. Для повышения эффективности лигазы к концам сшиваемых фрагментов ДНК химически присоединяют комплиментарные однонитивые олигонуклеотиды, например поли-А и поли-Т, создавая тем самым искусственные «липкие» концы.

Методы введения рекомбинантных молекул в клетки зависят от особенностей самих клеток и используемых векторов. В тех  случаях, когда векторами служат плазмиды, рекомбинантные ДНК вводят в реципиентные бактерии путем трансформации. Разработаны и методы трансформации  клеток животных, а также протопластов растений. Для защиты экзогенного  клеточного материала, вводимого в  клетки млекопитающих или в протопласты  растений, используют липосомы — сферические  тельца, оболочка которых состоит  из фосфолипидов. В составе липосом  в клетки высших эукариот введены  крупные вирусные РНК. Во всех случаях  липосомы надежно защищали молекулы нуклеиновых кислот от разрушения нуклеазами.

Один из путей  передачи генетической информации в  культуре клеток человека, животных и  растений — гибридизация соматических клеток, разработанная Б. Эфрусси  и Г. Барски (1960). Эффективность этого  метода значительно повысилась после  того, как было обнаружено, что частицы  инактивированного вируса парагриппа типа Сендай увеличивают частоту  слияния клеток из самых разных источников. Показана возможность передачи генов  из изолированных хромосом китайского хомячка в клетки соединительной ткани мыши. Описаны гибриды клеток человека и мыши, из которых часть хромосом человека удаляется, а часть остается функционально активной.